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(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102297904A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102297904A(43)申请公布日2011.12.28(21)申请号201010209201.4(22)申请日2010.06.25(71)申请人中国医学科学院药用植物研究所地址100193北京市海淀区马连洼北路151号(72)发明人杨美华张晓飞(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书3页说明书13页附图4页(54)发明名称一种检测不同基质中药中两种A型单端孢霉烯族毒素的方法(57)摘要一种检测不同基质中药中两种A型单端孢霉烯族毒素的方法,包括样品的提取,纯化及检测,所述的样品加氯化钠后采用甲醇-水(90∶10,V/V)高速匀质提取,过滤,加水稀释,玻璃纤维膜过滤,免疫亲和柱净化后氮气吹干,加衍生化试剂80℃衍生化40min,4%碳酸氢钠水溶液萃取杂质,取上层有机相稀释进样。其中衍生化试剂的配置为:无水硫酸钠对甲苯-乙腈(95∶5,V/V)溶液进行脱水干燥,取七氟丁酰咪唑适量,按照1∶3的比例加入加甲苯-乙腈(95∶5,V/V)溶液制成溶液。所述样品测定方法包括:气相色谱-电子捕获检测法测定,用DB-1701毛细管色谱柱分离,程序升温,不分流进样;气-质谱联用法确证,用HP-5MS毛细管色谱柱分离,以氦气为载气,程序升温,不分流进样。CN102974ACCNN110229790402297912A权利要求书1/3页1.一种检测不同基质中药中两种A型单端孢霉烯族毒素的方法,其特征在于该方法包括下列步骤:(1)用气相色谱-电子捕获检测法测定中药中的两种A型单端孢霉烯族毒素;(2)用气相色谱-质谱联用检测法确证中药中的两种A型单端孢霉烯族毒素;2.根据权利要求1的中药中两种A型单端孢霉烯族毒素的检测方法,其特征在于该方法包括下列步骤:(1)用气相色谱-电子捕获检测法测定中药中的两种A型单端孢霉烯族毒素;a.色谱条件:用毛细管色谱柱分离,电子捕获检测器检测,以氮气或氦气为载气,进样口温度260-280℃,检测器温度290-310℃,程序升温,不分流进样。b.溶液配制:对照品溶液的配制:分别称取对照品适量,加乙腈或甲醇制成溶液;衍生化试剂的配制:取七氟丁酰咪唑适量,加甲苯-乙腈溶液制成溶液。c.样品溶液的制备:样品提取:取药材粉末,置具塞锥形瓶中,加氯化钠适量,加甲醇-水溶液适量,高速匀质提取,过滤,稀释,震摇,静置,再震摇,再静置,玻璃纤维膜过滤,备用;样品净化:取上述滤液缓慢通过T-2&HT-2test-HPLC免疫亲和柱,直至空气通过柱体,再以水淋洗免疫亲和柱,弃去全部流出液,并使空气通过柱体。甲醇洗脱,收集洗脱液于玻璃试管中,氮气吹干备用。衍生化:加衍生化试剂适量于上述吹干样品,密封,涡旋混合,放入烘箱中反应,冷却,加正己烷适量,摇匀,加碳酸氢钠水溶液适量,涡旋,离心3-5min,取上层有机相,加正己烷定容。d.测定法:分别精密吸取对照品和样品溶液,注入气相色谱仪,测定。(2)用气相色谱-质谱联用检测法确证中药中的A型单端孢霉烯族毒素;a.色谱条件:用HP-5MS毛细管色谱柱分离,以氦气为载气,进样口温度260-280℃,程序升温,不分流进样;b.质谱条件:电子轰击离子源,离子源温度220-240℃,电离能量60-80eV,四级杆温度140-160℃,传输线温度270-290℃,溶剂延迟5-15min,全扫描。c.分别精密吸取对照品和样品溶液,注入气相色谱-质谱联用仪,确证。3.根据权利要求2的中药中两种A型单端孢霉烯族毒素的检测方法,其特征在于该方法包括下列步骤:(1)用气相色谱-电子捕获检测法测定中药中的两种A型单端孢霉烯族毒素;a.色谱条件:用DB-1701毛细管色谱柱分离,电子捕获检测器检测,以氮气或氦气为载气,进样口温度260-280℃,检测器温度290-310℃,程序升温,初始温度80℃,保持2min后以10℃/min速率升至200℃,再以5℃/min升至220℃,再以2℃/min升至230℃,保持13min,再以3℃/min升至270℃,再以5℃/min升至280℃保持5min,不分流进样。b.溶液配制:对照品溶液的配制:分别精密称取HT-2和T-2毒素对照品适量,加乙腈或甲醇制成每ml含30-60μg的溶液;衍生化试剂的配制:取七氟丁酰咪唑适量,按照1∶3的比例加入加甲苯-乙腈2CCNN110229790402297912A权利要求书2/3页(90-96∶4-10,V/V)溶液制成溶液。c.样品溶液的制备:样品提取:精密取药材粉末20-30g,置具塞锥形瓶中,加氯化钠适量1-5g,加甲醇-水溶液(80-95∶5-20,V/V)适量,高速匀质提取