镰刀菌单端孢霉烯族B类毒素PCR检测引物及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104561307A(43)申请公布日2015.04.29(21)申请号201510001950.0(22)申请日2015.01.05(71)申请人江苏省农业科学院地址210014江苏省南京市玄武区钟灵街50号(72)发明人仇剑波董飞徐剑宏史建荣(74)专利代理机构江苏圣典律师事务所32237代理人杨文晰孙忠浩(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表2页附图1页(54)发明名称镰刀菌单端孢霉烯族B类毒素PCR检测引物及其应用(57)摘要本发明公开一组镰刀菌单端孢霉烯族B类毒素PCR检测引物，包括如SEQIDNO.1所示的共用上游引物F，如SEQIDNO.2所示的3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇下游引物R1，如SEQIDNO.3所示的15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇下游引物R2，如SEQIDNO.4所示的雪腐镰刀菌烯醇下游引物R3，该组引物可应用于PCR直接检测3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇以及雪腐镰刀菌烯醇，成本低，操作简单，耗时短，检测结果准确，易于大规模推广应用。CN104561307ACN104561307A权利要求书1/1页1.一组镰刀菌单端孢霉烯族B类毒素PCR检测引物，包括如SEQIDNO.1所示的共用上游引物F，如SEQIDNO.2所示的3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇下游引物R1，如SEQIDNO.3所示的15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇下游引物R2，如SEQIDNO.4所示的雪腐镰刀菌烯醇下游引物R3。2.如权利要求1所述镰刀菌单端孢霉烯族B类毒素PCR检测引物在PCR检测3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇以及雪腐镰刀菌烯醇中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述PCR检测是指：以被检测材料DNA为模板，进行PCR反应，对PCR反应产物进行凝胶电泳，电泳产物中若出现376bp特异性条带，则检测材料中含有3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇；若电泳产物中出现443bp特异性条带，则检测材料中含有15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇；若电泳产物中出现246bp特异性条带，则检测材料中含有雪腐镰刀菌烯醇。4.根据权要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR反应的反应体系为：50ng模板DNA，2.5μL10×PCRBuffer缓冲液，1.25mM的dNTPs1μL，TaqDNA聚合酶0.3μL，10μM的共用上游引物F0.6μL，10μM的3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇下游引物R1、10μM的15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇下游引物R2、10μM的雪腐镰刀菌烯醇下游引物R3各0.2μL，ddH20补足至20μL；PCR反应条件：94℃5min;94℃30s，58℃30s，72℃30s，30个循环；72℃10min。2CN104561307A说明书1/5页镰刀菌单端孢霉烯族B类毒素PCR检测引物及其应用技术领域[0001]本发明属于食品安全检测领域，特别是镰刀菌单端孢霉烯族B类毒素PCR检测引物及其应用。背景技术[0002]由镰刀菌引起的赤霉病(Fusariumheadblightorscab)是世界范围内一种重要的流行性病害，它能够危害包括大麦、小麦、玉米、水稻等多种禾谷类作物。随着全球性气候变暖和区域性气候的反常以及耕作制度的变化，病害的发生频率增加，发生区域不断扩大。赤霉病不仅导致谷物的产量严重损失，而且镰刀菌可以产生多种真菌毒素，降低粮食和饲料的品质，严重威胁人和动物的健康，给食品安全带来重大隐患。[0003]单端孢霉烯族毒素是镰刀菌产生的最重要的真菌毒素，主要分为A、B两类。它能够抑制真核细胞蛋白质的合成，破坏人畜的棉衣系统，使中毒者出现呕吐、腹泻、头晕等多种症状，同时还有一定的致畸和致癌性，根据化学结构的不同，B类单端孢霉烯族毒素可以分为3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-acetyldeoxynivalenol，简称3ADON)、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-acetyldeoxynivalenol，简称15ADON)和雪腐镰刀菌烯醇(nivalenol，简称NIV)，在我国主要麦区，禾谷镰刀菌是(FusariumgraminearumSchwabe)引起赤霉病最主要的病原物，同时也是合成B类单端孢霉烯族毒素的主要病原菌，严重影响人和动物的安全。[0004]目前，真菌毒素含量的检测方法通常有生物学检测法，理化检测方法，免疫化学检测法等，生物测定法由于缺乏统一的规范化标准及检测分析不准确等原因，在实际镰刀菌毒素检测中未能得到广泛应用；化学测定法是目前用于镰刀菌毒素含量测定的主要方法，其特点是准确、重复性