番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN102876808102876808B(45)授权公告日2014.10.08(21)申请号201210370580.4j.ji,etal.MoleculardetectionofMuscovyduckparvovirusbyloop-mediated(22)申请日2012.09.27isothermalamplificationassay.《Poultry(73)专利权人广西壮族自治区兽医研究所Science》.2010,第89卷(第3期),477–483.地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北j.ji,etal.Moleculardetectionof路51号Muscovyduckparvovirusbyloop-mediated(72)发明人谢芝勋谢丽基刘加波庞耀珊isothermalamplificationassay.《Poultry邓显文谢志勤范晴Science》.2010,第89卷(第3期),477–483.(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限审查员靳春鹏公司11245代理人关畅(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)(56)对比文件薛超波等.环介导等温扩增技术检测副溶血性弧菌方法的建立与应用.《海峡预防医学杂权利要求书1页权利要求书1页说明书5页说明书5页志》.2012,第18卷(第3期),第3-4、17页.序列表2页序列表2页附图2页附图2页(54)发明名称番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒(57)摘要本发明公开了一种番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒。本发明提供了检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增引物组，包括引物1、引物2、引物3和引物4；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。本发明的实验证明，本发明MDPV的保守序列设计了针对8个特异区域的6条引物，用其进行LAMP检测，具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，仅需使用一台能控温的水浴锅，并且结果可以无需仪器而仅通过肉眼判定，适合在基层兽医站和养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。CN102876808BCN102876BCN102876808B权利要求书1/1页1.检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增引物组，由引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4；所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列5和序列6；所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的摩尔比为8：8：1：1：4：4。2.含有权利要求1所述的引物组的检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增试剂；所述环介导等温扩增试剂由权利要求1所述的引物组、环介导等温扩增缓冲液、DNA聚合酶、dNTPs、硫酸镁、钙黄绿素、甜菜碱、MnCl2和水组成；所述引物组中的引物1和所述引物2在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度均为1.6μmol/L；所述引物组中的引物3和所述引物4在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度均为0.2μmol/L；所述引物组中的引物5和所述引物6在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度均为0.8μmol/L；所述dNTPs在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度为1.4mmol/L；所述DNA聚合酶在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度为320U/L；所述甜菜碱在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度为1mmol/L；所述硫酸镁在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度为7mmol/L；所述钙黄绿在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度为25μmol/L；所述MnCl2在所述环介导等温扩增试剂中的终浓度为0.5mmol/L。3.检测番鸭细小病毒的环介导等温扩增试剂盒，包括权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的环介导等温扩增试剂。4.权利要求1所述的引物组、权利要求2所述的环介导等温扩增试剂或权利要求3所述环介导等温扩增试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有番鸭细小病毒的产品中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述应用采用环介导等温扩增，所述环介导等温扩增的条件为63℃反应50h，80℃作用5min灭活。2CN102876808B说明书1/5页番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种番鸭细小病毒LAMP检测试剂盒。背景技术[0002]番鸭细小病毒(Muscovyducklingparvovirus，MDPV)，是危害番鸭养殖的重要病原，可引起1周龄-3周龄雏番鸭发