厌氧超低温菌种保藏剂.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CN103146580B(45)授权公告日(45)授权公告日2015.02.25(21)申请号201310072683.7(22)申请日2013.03.07(73)专利权人西北民族大学地址730030甘肃省兰州市城关区西北新村一号(72)发明人牛锋吴慧昊黄晓磊龙玲李建江徐红伟傅思武关晓莉(74)专利代理机构兰州中科华西专利代理有限公司62002代理人李艳华(51)Int.Cl.C12N1/04(2006.01)审查员孙永福权利要求书2页说明书8页(54)发明名称厌氧超低温菌种保藏剂(57)摘要本发明涉及一种厌氧超低温菌种保藏剂，该保藏剂由以下体积百分比的原料组成：营养肉汤20.0~21.1%、保护剂26.3~30.0%、分散剂30.0~31.5%以及去离子水19.3~21.4%。同时本发明还公开了该保藏剂的制备方法。本发明依据菌种保藏的基本原理，充分创造有利于微生物休眠的环境条件，最大限度地降低菌种的基础代谢水平，对有氧、严格厌氧或兼性厌氧微生物都有很好的保护率，保护效果稳定，菌种变异程度极小，复苏率高，并且既可以用于菌种的厌氧超低温保藏，也可以用于菌种的液氮（-196℃）超低温保藏及低温冷冻干燥保藏，增大了保藏剂的使用范围，从而解决了厌氧超低温条件下的菌种保藏难题，延长菌种的保藏期达几十年。CN103146580BCN103146580B权利要求书1/2页1.厌氧超低温菌种保藏剂，其特征在于：该保藏剂由以下体积百分比的原料组成：营养肉汤20.0~21.1%、保护剂26.3~30.0%、分散剂30.0~31.5%以及去离子水19.3~21.4%；所述营养肉汤由0.3~1.0%的多肽类物质、1.0~1.6%的蛋白质类物质及97.5~98.7%的去离子水按质量百分比混合而成；所述多肽类物质是指牛肉膏粉、酵母浸粉、麦芽汁浸粉中的一种或几种；所述蛋白质类物质是指蛋白胨、鱼粉、蚕蛹粉中的一种或几种；所述保护剂由35.0~40.0%的醇类、35.0~40.0%的抗冻剂、20.0~25.0%的脂肪酸类按质量百分比混合而成；所述醇类是指丙三醇、异丙醇、丙二醇中的一种或几种经80.0℃鼓风干燥过夜后得到的无水醇；所述抗冻剂是指亚砜、二甲基亚砜、二甲基砜中的一种或几种；所述脂肪酸类是指亚油酸、亚麻酸、共轭亚油酸中的一种或几种；所述分散剂由65.0~68.0%的蛋白质类、31.4~34.4%的糖类、0.3~0.5%的谷氨酸钠、0.15~0.3%的L-半胱氨酸按质量百分比混合而成；所述蛋白质类是指全脂牛奶、脱脂牛奶中的一种或几种；所述糖类是指乳糖、麦芽糖、果糖中的一种或几种；所述去离子水为无氧的去离子水，且其电阻值为18.0兆欧。2.如权利要求1所述的厌氧超低温菌种保藏剂的制备方法，包括以下步骤：⑴量取按质量百分比占保护剂35.0~40.0%醇类和35.0~40.0%抗冻剂于烧杯Ⅰ中，充分混合后转移至锥形瓶Ⅰ中，在常温常压下加热煮沸的同时通入无氧氮气进行除氧，然后用可调定量加液器等量分装于2只无氧的厌氧瓶Ⅰ中，标记为A瓶，加塞封口，经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后备用；所述醇类是指丙三醇、异丙醇、丙二醇中的一种或几种经80.0℃鼓风干燥过夜后得到的无水醇；所述抗冻剂是指亚砜、二甲基亚砜、二甲基砜中的一种或几种；⑵量取按质量百分比占营养肉汤97.5~98.7%、电阻值为18.0兆欧的去离子水于烧杯Ⅱ中，按照顺序依次将按质量百分比占营养肉汤0.3~1.0%多肽类物质、1.0~1.6%蛋白质类物质、按质量百分比占分散剂31.4~34.4%糖类、0.3~0.5%谷氨酸钠和0.15~0.3%L-半胱氨酸加入所述烧杯Ⅱ，充分溶解后转移至锥形瓶Ⅱ中，在常温常压下加热煮沸的同时通入无氧氮气进行除氧，然后用可调定量加液器等量分装于2只无氧的厌氧瓶Ⅱ中，标记为B瓶，加塞封口，经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后备用；所述去离子水为无氧的去离子水，且其电阻值为18.0兆欧；所述多肽类物质是指牛肉膏粉、酵母浸粉、麦芽汁浸粉中的一种或几种；所述蛋白质类物质是指蛋白胨、鱼粉、蚕蛹粉中的一种或几种；所述糖类是指乳糖、麦芽糖、果糖中的一种或几种；⑶量取按体积百分比占保藏剂19.3~21.4%的去离子水在常温常压下加热煮沸的同时通入无氧氮气进行除氧，然后用可调定量加液器等量分装于2只无氧的厌氧瓶Ⅲ中，标记为C瓶，加塞封口，经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后备用；所述去离子水为无氧的去离子水，且其电阻值为18.0兆欧；⑷用无氧氮气填充厌氧瓶Ⅳ进行除氧，经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后完全干燥备用；一次性无菌注射器经115.0℃高压蒸汽灭菌30分钟后完全干燥备用；⑸将所述厌氧瓶Ⅰ、厌氧瓶Ⅱ、