菌种的保藏0.doc

(完整word)菌种的保藏(完整word)菌种的保藏(完整word)菌种的保藏第八章菌种的保藏要点：菌种的衰退：菌种衰退的现象可表现在形态上或生理上。其主要原因是基因突变,连续传代和采用不适宜的培养和保藏条件也可加速菌种的衰退.为防止菌种衰退可采取一些措施，如控制传代次数、创造良好的培养条件、利用不同类型的细胞移种传代、采用有效的菌种保藏方法、讲究菌种选育技术及定期进行分离纯化等。菌种的复壮:从已衰退的菌种中筛选出少数尚未退化的个体,以达到恢复原菌株固有性状的方法是一种“狭义的复壮”，目前较提倡的是被称为“广义复壮”的一种积极措施，即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状测定工作，以期从中选择到自发的正突变个体。菌种复壮常用方法有：纯种分离法、宿主体内复壮法、淘汰法和遗传育种法。菌种的保藏：菌种保藏的目的是尽可能保持菌种原有性状和活力的稳定，使其不死、不变、不被污染,以提供给科研、生产和实验的需要。为防止突变，保持纯种，最主要的保藏措施是干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养、添加保护剂等。保藏菌种的方法有：斜面低温保藏法、石蜡油封藏法、砂土管保藏法、麸皮保藏法、甘油悬液保藏法、冷冻真空干燥保藏法、液氮超低温保藏法和宿主保藏法等。第一节菌种的衰退和复壮在微生物的基础研究和应用研究中,选育一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性,便于长期使用，还需要做很多日常的工作。实际上，由于各种各样的原因,要使菌种永远不变是不可能的,菌种衰退是一种潜在的威胁.只有掌握了菌种衰退的某些规律，才能采取相应的措施，尽量减少菌种的衰退或使已衰退的菌种得以复壮。一、菌种的衰退(一）菌种衰退的现象菌种衰退（degeneration）是指由于自发突变的结果，而使某物种原有的一系列生物学性状发生量变或质变的现象。菌种衰退的具体表现有以下几个方面：1。菌落和细胞形态改变。每一种微生物在一定的培养条件下都有一定的形态特征,如果典型的形态特征逐渐减少，就表现为衰退。例如，泾阳链霉菌“5406”的菌落原来为凸形变成了扇形、帽形或小山形；孢子丝由原来螺旋形变成波曲形或直形，孢子从椭圆形变成圆柱形等。2.生长速度缓慢,产孢子越来越少.例如，“5406”的菌苔变薄，生长缓慢（半个月以上才长出菌落），不产生丰富的桔红色的孢子层，有时甚至只长些黄绿色的基内菌丝。3.代谢产物生产能力的下降,即出现负突变.例如，黑曲霉糖化力、放线菌抗生素发酵单位的下降以及各种发酵代谢产物量的减少等,在生产上是十分不利的。4.致病菌对宿主侵染能力下降.如白僵菌对宿主致病能力的降低等。5。对外界不良条件（包括低温、高温或噬菌体侵染等）抵抗能力的下降等。如抗噬菌体菌株变为敏感菌株等。值得指出的是，有时培养条件的改变或杂菌污染等原因会造成菌种衰退的假象，因此在实践工作中一定要正确判断菌种是否退化，这样才能找出正确的解决办法。（二）菌种衰退的原因菌种衰退不是突然发生的，而是从量变到质变的逐步演变过程.开始时，在群体细胞中仅有个别细胞发生自发突变（一般均为负变），不会使群体菌株性能发生改变。经过连续传代,群体中的负变个体达到一定数量,发展成为优势群体,从而使整个群体表现为严重的衰退。经分析发现，导致这一现象的原因有以下几方面。1。基因突变(1）有关基因发生负突变导致菌种衰退菌种衰退的主要原因是有关基因的负突变。如果控制产量的基因发生负突变，则表现为产量下降；如果控制孢子生成的基因发生负突变，则产生孢子的能力下降.菌种在移种传代过程中会发生自发突变。虽然自发突变的几率很低(一般为10—6～10—9），尤其是对于某一特定基因来说，突变频率更低。但是由于微生物具有极高的代谢繁殖能力，随着传代次数增加，衰退细胞的数目就会不断增加，在数量上逐渐占优势，最终成为一株衰退了的菌株.（2）表型延迟造成菌种衰退表型延迟现象也会造成菌种衰退。如，在诱变育种过程中，经常会发现某菌株初筛时产量较高，进行复筛时产量却下降了。（3）质粒脱落导致菌种衰退质粒脱落导致菌种衰退的情况在抗生素生产中较多，不少抗生素的合成是受质粒控制的。当菌株细胞由于自发突变或外界条件影响(如高温）,致使控制产量的质粒脱落或者核内DNA和质粒复制不一致,即DNA复制速度超过质粒，经多次传代后，某些细胞中就不具有对产量起决定作用的质粒，这类细胞数量不断提高达到优势，则菌种表现为衰退。2。连续传代连续传代是加速菌种衰退的一个重要原因。一方面，传代次数越多,发生自发突变（尤其是负突变）的几率越高;另一方面,传代次数越多，群体中个别的衰退型细胞数量增加并占据优势越快，致使群体表型出现衰退。3.不适宜的培养和保藏条件不适宜的培养和保藏条件是加速菌种衰退的另一个重要原因。不良的培养条件如营养成分、温度、湿度、p