一种北冬虫夏草的特异PCR鉴真方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103602754103602754A(43)申请公布日2014.02.26(21)申请号201310665903.7(22)申请日2013.12.11(71)申请人中国食品发酵工业研究院地址100015北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼申请人玉树藏族自治州三江源药业有限公司(72)发明人程池扎西才吉李辉姚粟刘洋白飞荣(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书2页说明书2页附图1页附图1页(54)发明名称一种北冬虫夏草的特异PCR鉴真方法(57)摘要本发明公开了一种北冬虫夏草的特异PCR鉴真方法。其技术方案是以样品的基因组DNA为模板，采用本发明设计的特异PCR引物，进行一次单管特异PCR反应，扩增冬北冬虫夏草的特征性持家基因，实际扩增片断为417bp，通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，判断样品的真实性。本发明可特异性识别北冬虫夏草，只需DNA提取、PCR扩增和电泳检测三步即可完成对北冬虫夏草及其菌丝体、菌粉和胶囊等不同剂型产品的真实性检测，操作简单、易于掌握、准确性高。CN103602754ACN10362754ACN103602754A权利要求书1/1页1.一种北冬虫夏草的鉴真方法，其特征在于：经过一次简单的特异PCR反应检测北冬虫夏草特征性持家基因。2.按照权利要求1所述的北冬虫夏草鉴真方法，其特征在于：用于检测北冬虫夏草持家基因的特异PCR引物为：上游引物CICC-Cor-F1：5’-AGCGAAACCCGTCTATCACC-3’下游引物CICC-Cor-R1：5’-CTTGGGGCCTTCTTCCGAAT-3’。3.按照权利要求2所述的北冬虫夏草鉴真方法，其特征在于：PCR扩增反应体系为25µL，其中10×Taqreactionbuffer2.5µL，2条引物（10μmol/L）各1µL，10μmol/L的dNTP2µL，2.5U的Taq酶0.5µL，DNA模板1.0µL，ddH2O17µL。4.按照权利要求3所述的北冬虫夏草鉴真方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min，进入循环：95℃30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，然后72℃延伸5min。5.按照权利要求4所述的北冬虫夏草鉴真方法，其特征在于：PCR扩增产物采用2%的琼脂糖凝胶进行检测。6.按照权利要求5所述的北冬虫夏草鉴真方法，其特征在于：在417bp处有电泳条带的样品为北冬虫夏草。2CN103602754A说明书1/2页一种北冬虫夏草的特异PCR鉴真方法技术领域[0001]本发明属于新资源保健食品鉴真领域，具体涉及北冬虫夏草的鉴真方法。背景技术[0002]北冬虫夏草科学名为蛹虫草（Cordycepsmilitaris），是一味我国民间传统的名贵中药，其成分和功效与冬虫夏草相似，既能加工成药品保健品，又是餐桌上的佳肴，因此广受消费者喜爱。[0003]作为冬虫夏草替代品，北冬虫夏草具有可人工栽培，产量高，成本低等优点，已形成规模化生产。据统计，我国2012年北冬虫夏草的生产量接近8000吨，市场规模达到近15亿元。然而，目前尚没有专门用于北冬虫夏草真假鉴别和质量控制的标准方法，产品质量难以保证，极大限制了北冬虫夏草产业的升级和规范发展。[0004]因此，在北冬虫夏草生产和流通过程中，亟需一种有效、快速、准确的鉴真方法，以实现对其品质的控制和管理。发明内容[0005]本发明的目的是提供一种可用于北冬虫夏草鉴真的可靠方法。[0006]为达到上述目的，本发明设计了北冬虫夏草性持家基因的特异PCR引物，通过一次单管PCR反应，扩增北冬虫夏草特征性持家基因，实际扩增片断为417bp。[0007]用于北冬虫夏草鉴真的引物序列如下：上游引物CICC-Cor-F1：5’-AGCGAAACCCGTCTATCACC-3’下游引物CICC-Cor-R1：5’-CTTGGGGCCTTCTTCCGAAT-3’。[0008]本发明采用的技术方案如下：1)获取样品基因组DNA；2)采用上述引物在PCR仪上进行PCR扩增；PCR扩增反应体系为25µL，其中10×Taqreactionbuffer2.5µL，2条引物（10μmol/L）各1µL，10μmol/L的dNTP2µL，2.5U的Taq酶0.5µL，DNA模板1.0µL，ddH2O17µL。[0009]PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min，进入循环：95℃30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，然后72℃延伸5min。[0010]3)PCR扩增产物用2%的琼脂糖凝胶进行检测。[0011]4)样品的真实性判断在紫外灯下