一种蝙蝠蛾拟青霉菌粉的特异PCR鉴真方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103614484103614484A(43)申请公布日2014.03.05(21)申请号201310667351.3(22)申请日2013.12.11(71)申请人中国食品发酵工业研究院地址100015北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼申请人玉树藏族自治州三江源药业有限公司(72)发明人程池扎西才吉李辉姚粟刘洋白飞荣(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12Q1/04(2006.01)C12R1/79(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书2页说明书2页附图1页附图1页(54)发明名称一种蝙蝠蛾拟青霉菌粉的特异PCR鉴真方法(57)摘要本发明公开了一种蝙蝠蛾拟青霉菌粉的特异PCR鉴真方法。其技术方案是以样品的基因组DNA为模板，采用本发明设计的特异PCR引物，进行一次单管特异PCR反应，扩增冬蝙蝠蛾拟青霉的特征性持家基因，实际扩增片断为231bp，通过琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，判断样品的真实性。本发明可特异性识别蝙蝠蛾拟青霉菌粉，只需DNA提取、PCR扩增和电泳检测三步即可完成对样品的真实性检测，操作简单、易于掌握、准确性高。CN103614484ACN103648ACN103614484A权利要求书1/1页1.一种蝙蝠蛾拟青霉菌粉的鉴真方法，其特征在于：经过一次简单的特异PCR反应检测蝙蝠蛾拟青霉特征性持家基因。2.按照权利要求1所述的蝙蝠蛾拟青霉菌粉鉴真方法，其特征在于：用于检测蝙蝠蛾拟青霉持家基因的特异PCR引物为：上游引物CICC-Pae-F1：5’-GAGCATGGTCTCGACTCT-3’下游引物CICC-Pae-R1：5’-CGAAGGGACCAGCACGG-3’。3.按照权利要求2所述的蝙蝠蛾拟青霉菌粉鉴真方法，其特征在于：PCR扩增反应体系为25µL，其中10×Taqreactionbuffer2.5µL，2条引物（10μmol/L）各1µL，10μmol/L的dNTP2µL，2.5U的Taq酶0.5µL，DNA模板1.0µL，ddH2O17µL。4.按照权利要求3所述的蝙蝠蛾拟青霉菌粉鉴真方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min，进入循环：95℃30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，然后72℃延伸5min。5.按照权利要求3所述的蝙蝠蛾拟青霉菌粉鉴真方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5min，进入循环：95℃30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，然后72℃延伸5min。6.按照权利要求5所述的蝙蝠蛾拟青霉菌粉鉴真方法，其特征在于：在231bp处有电泳条带的样品为蝙蝠蛾拟青霉菌粉。2CN103614484A说明书1/2页一种蝙蝠蛾拟青霉菌粉的特异PCR鉴真方法技术领域[0001]本发明属于保健食品鉴真领域，具体涉及蝙蝠蛾拟青霉菌粉的鉴真方法。背景技术[0002]蝙蝠蛾拟青霉是从冬虫夏草原草中分离得到的重要药用真菌，可产生虫草酸、虫草素、虫草多糖等多种重要的功效性成分，具有增强免疫力、缓解体力疲劳等保健功能，其有效作用已获得民间的广泛认可。[0003]自2001年被列入中国卫生部发布的“可用于保健食品的真菌菌种名单”以来，蝙蝠蛾拟青霉作为保健食品生产原料受到广泛关注，尤其是在其发酵菌丝体的基础上已开发出多种不同类型的保健食品。据统计，2012年我国生产蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体原料3000吨，产值已达到50亿元。然而，目前尚没有专门用于蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝体真假鉴别和质量控制的标准方法，产品质量难以保证，极大限制了蝙蝠蛾拟青霉产业的升级和规范发展。[0004]因此，在蝙蝠蛾拟青霉发酵菌粉生产和流通过程中，亟需一种有效、快速、准确的鉴真方法，以实现对其品质的控制和管理。发明内容[0005]本发明的目的是提供一种可用于蝙蝠蛾拟青霉菌粉鉴真的可靠方法。[0006]为达到上述目的，本发明设计了蝙蝠蛾拟青霉性持家基因的特异PCR引物，通过一次单管PCR反应，扩增蝙蝠蛾拟青霉特征性持家基因，实际扩增片断为231bp。[0007]用于蝙蝠蛾拟青霉菌粉鉴真的引物序列如下：上游引物CICC-Pae-F1：5’-GAGCATGGTCTCGACTCT-3’下游引物CICC-Pae-R1：5’-CGAAGGGACCAGCACGG-3’。[0008]本发明采用的技术方案如下：1)获取样品基因组DNA；2)采用上述引物在PCR仪上进行PCR扩增；PCR扩增反应体系为25µL，其中10×Taqreactionbuffer2.5µL，2条引物（10μmol/L）各1µL，10μmol/L的dNTP2µL，2.5U的Taq酶