一种提取菠萝蛋白酶的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104611316A(43)申请公布日2015.05.13(21)申请号201510079707.0(22)申请日2015.02.13(71)申请人广西壮族自治区分析测试研究中心地址530022广西壮族自治区南宁市青秀区星湖路32号(72)发明人黎颖林葵谢庆武周宁刘守廷(74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350代理人罗保康(51)Int.Cl.C12N9/50(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图1页(54)发明名称一种提取菠萝蛋白酶的方法(57)摘要本发明公开了一种提取菠萝蛋白酶的方法，首先将新鲜菠萝皮或菠萝茎叶洗净,然后经过榨汁、过滤、离心等处理，获得杂质少的菠萝汁，经过超滤，将菠萝汁中的金属离子等小分子物质透析去除，使电导率降低95％以上，然后将所得的电导率低的菠萝汁的pH调至3～5，并将菠萝汁冷却至4～8℃，静置2～3小时，使菠萝蛋白酶产生絮状沉淀。通过5000～8000转/分钟离心条件收集絮状沉淀，得到酶膏。最后将酶膏冷冻干燥，获得干燥的菠萝蛋白酶。本发明提取的菠萝蛋白酶，不含任何添加的杂质，具有酶活力高、杂质少，提取工艺简单，生产成本低，回收率高，设备投入少，易于扩大生产规模。CN104611316ACN104611316A权利要求书1/1页1.一种提取菠萝蛋白酶的方法，包括以下步骤：(1)去杂质菠萝汁的制备：将新鲜菠萝皮或菠萝茎叶原料清洗，榨汁，菠萝汁经60～100目滤网过滤，离心分离后，取上清液；(2)透析：利用超滤设备的超滤功能，将经步骤（1）处理的菠萝汁中的金属离子等小分子物质透析去除，使电导率降低95％以上；(3)酶的沉淀：将经步骤（2）处理的电导率低的菠萝汁的pH调至3～5，并冷却至2～8℃，静置2～3小时，使菠萝蛋白酶产生絮状沉淀；(4)离心收集酶膏：将经过酶沉淀的菠萝汁离心分离，获得酶膏；(5)冷冻干燥：将酶膏冷冻干燥，得到干燥的菠萝蛋白酶成品。2.根据权利要求1所述的提取菠萝蛋白酶的方法，其特征在于，步骤(1)及步骤(4)中所述的离心是采用高速碟片离心机离心。3.根据权利要求1所述的提取菠萝蛋白酶的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的透析是采用超滤装置；超滤装置由一个泵和超滤膜组成，所用超滤膜：截留分子量为20KD的内压式中空纤维超滤膜。4.根据权利要求1或2所述的提取菠萝蛋白酶的方法，其特征在于，步骤(1)及步骤(4)中所述的离心机转速为5000～8000转/分钟。5.根据权利要求1所述的提取菠萝蛋白酶的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的调菠萝汁的pH所用的酸是盐酸或醋酸，酶沉淀的温度为1-5℃。6.根据权利要求1所述的提取菠萝蛋白酶的方法，其特征在于，所述的原料还包括剑麻叶。2CN104611316A说明书1/3页一种提取菠萝蛋白酶的方法技术领域[0001]本发明涉及一种植物酶的提取方法，特别是提取菠萝蛋白酶的方法。背景技术[0002]菠萝蛋白酶(bromelain，EC3.4.22.33)是存在于菠萝类植株（包括果、茎、柄和叶片）、剑麻叶中的蛋白水解酶，有多个同工酶，其活性中心含有巯基（－SH），所以属巯基蛋白酶。菠萝蛋白酶广泛用于医药、食品、化妆品、纺织、饲料、皮革等行业。它能分解纤维蛋白、血红蛋白等蛋白质，能在副作用较小的情况下使纤维蛋白和血凝块溶解，进而改善体液循环，增加组织通透性，导致炎症、水肿消退；与抗生素、化疗药物合用可促进药物对病灶的渗透和扩散，从而增强疗效。[0003]蛋白质的提取纯化方法主要有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、单宁(鞣酸)沉淀、离子交换层析、亲和层析、超滤浓缩等方法。菠萝蛋白酶的生产工艺主要有硫酸铵沉淀法、单宁沉淀法、超滤法等，这些方法都有其缺点：硫酸铵沉淀法需要使用大量的硫酸铵，环境污染严重；单宁沉淀法所得的酶制剂难溶于水，酶活力低；超滤法所需设备投资大，菠萝汁超滤浓缩过程中黏度逐渐加大，超滤膜极易堵塞，因此生产周期长，提取收率低。发明内容[0004]为了解决上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种提取菠萝蛋白酶的方法。[0005]本发明的目的通过如下技术方案实现：一种提取菠萝蛋白酶的方法，包括以下步骤：(1)去杂质菠萝汁的制备：新鲜菠萝皮或菠萝茎叶原料清洗，洗净附在其表面的泥土等杂质，榨汁，菠萝汁经60～100目滤网过滤，离心分离后，取上层清液。[0006](2)透析：利用超滤设备的超滤功能，将经步骤（1）处理的菠萝汁中的金属离子等小分子物质透析去除，使电导率降低95％以上；所述的透析是采用超滤装置；超滤装置由一个泵和超滤膜组成，所用超滤膜：截留分子量为20KD的内压式中空纤维超滤膜。[0007](3)酶的沉淀：将经步骤（2）处理的电导