同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105349697A(43)申请公布日2016.02.24(21)申请号201510843579.2C12R1/93(2006.01)(22)申请日2015.11.27(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋李孟谢志勤罗思思谢丽基黄莉邓显文黄娇玲范晴张艳芳曾婷婷王盛(74)专利代理机构北京中誉威圣知识产权代理有限公司11279代理人王正茂(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图2页(54)发明名称同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测试剂盒及其应用(57)摘要本发明属于禽类病毒检测技术领域，本发明公开了一种同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测引物组、试剂盒及其应用。发明人基于GeXP系统研究设计了9对特异性引物和1对通用引物，据此建立了同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测试剂盒。应用本发明可同时鉴别M、H1、H2、H3、H5、H6、H7、H9和H109个基因的八种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因，灵敏度为102拷贝/μL。本发明具有高通量、特异性强、灵敏度高且快速等优点，对感染人不同亚型禽流感病毒的流行病学调查及其鉴别诊断具有重要意义。CN105349697ACN105349697A权利要求书1/1页1.一种同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测引物组，其特征在于：包括9对特异性引物和1对通用引物；9对特异性引物分别是引物对A1和A2、引物对B1和B2、引物对C1和C2、引物对D1和D2、引物对E1和E1、引物对F1和F2、引物对G1和G2、引物对H1和H2、引物对I1和I2；1对通用引物为Cy5-Tag-F和Tag-R；其分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.20所示的序列。2.一种同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测试剂盒，包括cDNA、10×PCRbuffer、MgCl2、dNTP、JumpstartTaqpolymerase、9对特异性引物、1对通用引物和RNA-free水，其特征在于：所述的9对特异性引物、1对通用引物分别具有如SEQIDNo.1至SEQIDNo.20所示的序列。3.根据权利要求2所述的同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测试剂盒，其特征在于：所述的9对特异性引物A1和A2、引物对B1和B2、引物对C1和C2、引物对D1和D2、引物对E1和E2、引物对F1和F2、引物对G1和G2在PCR反应体系中对应的的摩尔浓度分别为150nmol/L、100nmol/L、100nmol/L、150nmol/L、100nmol/L、100nmol/L、100nmol/L、100nmol/L、100nmol/L；所述的通用引物Cy5-Tag-F、Tag-R在PCR反应体系中的摩尔浓度为500nmol/L。4.根据权利要求3所述的同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒的总体积为25μL/管，其中包含：cDNA2.0μL，10×PCRbuffer2.5μL，MgCl22.5μL，dNTP1μL，JumpstartTaqpolymerase1.2μL，9对特异性引物混合物1.25μL，上、下游通用引物混合物1.25μL，RNA-free水补足至25μL。5.根据权利要求1所述的同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测引物组或权利要求2-4任一所述的同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测试剂盒在鉴别H1、H2、H3、H5、H6、H7、H9和H10亚型禽流感病毒中的应用。2CN105349697A说明书1/11页同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测试剂盒及其应用技术领域[0001]本发明属于禽类病毒检测技术领域，尤其涉及一种同时鉴别8种感染人不同亚型禽流感病毒HA基因的GeXP快速检测引物组、试剂盒及其应用。背景技术[0002]流感病毒是目前危害人类健康的主要病原微生物之一，不但造成了巨大的经济损失,而且影响着社会的稳定。流感病毒的天然宿主是禽类，而禽流感病毒可以突破种间屏障去感染人。迄今为止，能感染人类并引起人类流感大流行或季节性流感的A型流感病毒仅有H1N1、H2N2和H3N2亚型的流感病毒，从溯源上来说，人流感病毒都来源于禽流感病毒。近年来，H5亚型高致病性禽流感在家禽中常有暴发，造成