毛酸浆内酯的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105524135A(43)申请公布日2016.04.27(21)申请号201510995150.5(22)申请日2015.12.25(71)申请人天津中医药大学地址300193天津市南开区鞍山西道312号(72)发明人陈丽霞邱峰夏桂阳康宁丁丽琴王丽晴(74)专利代理机构北京柏杉松知识产权代理事务所(普通合伙)11413代理人刘继富王春伟(51)Int.Cl.C07J71/00(2006.01)A61K31/58(2006.01)A61P35/00(2006.01)A61P35/02(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图4页(54)发明名称毛酸浆内酯的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用(57)摘要本发明公开了毛酸浆内酯(physapubescin)的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。毛酸浆内酯的作用机制是通过激活caspase家族相关蛋白，使下游靶蛋白DNA修复酶PARP裂解，诱导肿瘤细胞发生凋亡；同时，毛酸浆内酯可抑制HIF2α的表达，同时可以上调CHOP的表达，CHOP作为转录因子上调死亡受体DR5从而促进癌细胞凋亡；TRAIL和毛酸浆内酯能够发生协同作用，与二者分别单独给予肾癌细胞时相比，可更显著地作用于caspase家族相关蛋白及其下游的PARP蛋白，诱导细胞发生凋亡。毛酸浆内酯可配制为消化道及非消化道给药剂型，用于人肾细胞癌等肿瘤的治疗。CN105524135ACN105524135A权利要求书1/2页1.毛酸浆内酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用植物毛酸浆的全草为原料，通过体积分数为40～100％的甲醇或乙醇进行回流提取，液料重量比为5:1～10:1，40～100℃回流提取1～5小时，提取次数为1～5次；得到提取物；(2)将步骤(1)得到的提取物用极性在0-0.2之间的小极性有机溶剂萃取一次或多次；(3)将步骤(2)中萃取后的剩余水层部分用极性在3-5.6之间的中等极性有机溶剂萃取一次或多次得到萃取液，浓缩后，采用柱色谱分离，以二氯甲烷和甲醇组成的洗脱体系进行洗脱得到含有毛酸浆内酯的第一混合组分，所述柱色谱用的填料为100-300目的柱色谱硅胶；或将步骤(2)中萃取后的剩余水层部分通过大孔吸附树脂吸附，并以乙醇和水组成的洗脱体系洗脱得含毛酸浆内酯的第二混合组分；再将含毛酸浆内酯的第二混合组分采用柱色谱分离，该柱色谱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，并以甲醇和水组成的洗脱体系进行洗脱得到含有毛酸浆内酯的单一组分；(4)将步骤(3)中所获得的含有毛酸浆内酯的第一混合组分或含有毛酸浆内酯的单一组分，采用制备高效液相色谱法，以甲醇和水组成的洗脱体系洗脱并浓缩，得到毛酸浆内酯；所述制备高效液相色谱法所用的填料为十八烷基硅烷键合硅胶。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述小极性有机溶剂包括：石油醚、正已烷及环已烷中的至少一种；所述中等极性有机溶剂包括：氯仿、二氯甲烷及乙酸乙酯中的至少一种。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂包括：AB-8型、D101型、DM130型、ADS-17型、HPD-100型、HPD-300型及HPD-600型中的任意一种。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述以二氯甲烷和甲醇组成的洗脱体系进行洗脱，具体为：以二氯甲烷和甲醇的体积比先后为100:1，70:1，50:1，20:1，10:1，1:1进行梯度洗脱；步骤(3)中所述以乙醇和水组成的洗脱体系进行洗脱，具体为：先用40～50％乙醇水溶液洗脱，再用60～90％乙醇水溶液洗脱；步骤(3)中所述以甲醇和水组成的洗脱体系进行洗脱，具体为：先用体积百分数30～40％甲醇水溶液洗脱，再用体积百分数50～60％甲醇水溶液洗脱；最后用体积百分数90～100％甲醇水溶液洗脱；步骤(4)中所述以甲醇和水组成的洗脱体系进行洗脱，具体为：用含甲醇体积百分数50～80％的甲醇水溶液进行洗脱。5.毛酸浆内酯在制备抗肿瘤药物中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肾癌、人前列腺癌、人膀胱癌、人纤维肉瘤、人黑色素瘤、人肝癌、人宫颈鳞癌、人子宫癌、人肺腺癌、人组织细胞淋巴瘤、人结肠癌、人表皮癌、人乳腺癌、人白血病或人喉鳞癌。7.如权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述毛酸浆内酯通过引起caspase家族蛋白剪切为活性形式进而裂解PARP，促进肿瘤细胞凋亡；或者所述毛酸浆内酯通过抑制HIF2α表达和/或上调DR3、DR5、CHOP表达，促进肿瘤细胞凋亡。2CN105524135A权利要求书2/2页8.如权利要求5-7中任意一项所述的应用，其特征在于，所述毛酸浆内酯可以与TRAIL共同应用于抗肿瘤药物的制备。9.一