一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105954453A(43)申请公布日2016.09.21(21)申请号201610304169.5(22)申请日2016.05.10(71)申请人首都儿科研究所地址100020北京市朝阳区雅宝路2号申请人北京汇智泰康医药技术有限公司(72)发明人张霆刘鸿君吴建新霍军生张敏邵立军杜克贺王国才(74)专利代理机构北京市盈科律师事务所11344代理人王柱(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/89(2006.01)G01N33/82(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图6页(54)发明名称一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒(57)摘要本发明提供一种同时定量检测末梢全血中烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒，主要由末梢全血采集所需干血片(Whatmanproteinsaver903)，毛细采血管，烟酸、烟酰胺和泛酸维生素标准品及其同位素内标，三氯乙酸组成，还包括干血点制备、干血点前处理和检测步骤。本发明提供的烟酸、烟酰胺、泛酸干血点定量试剂盒，将干血点采样技术与高效液相色谱-串联质谱技术联合用于B族维生素定量，一次微创，微量的血液采集同时实现对多种B族维生素营养状况的评估，能够实现代谢酶依赖法、免疫分析法所无法完成的低样本量条件下同时检测多种维生素的定量工作。CN105954453ACN105954453A权利要求书1/1页1.一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒，主要由末梢全血采集所需干血片，毛细采血管，烟酸、烟酰胺和泛酸维生素标准品及其同位素内标，三氯乙酸组成，其特征在于：还包括干血点制备、干血点前处理和检测步骤，其中：干血点制备，用毛细采血管采集50μL末梢全血于干血片上，暗处静置阴干制成干血点，密封保存；干血点前处理，取干血点，加入由同位素内标配置的内标溶液和有三氯乙酸配置的溶液，涡旋并使液面浸泡过干血点，避光超声提取，涡旋震荡，离心处理，制成待检测溶液；检测步骤，取部分待检测溶液，进行LC-MS/MS分析。2.根据权利要求1所述的一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒，其特征在于：所述的维生素标准品为：烟酸，CAS号：59-67-8，纯度≥99.5％；烟酰胺，CAS号：98-92-0，纯度≥99.5％)；泛酸，CAS号：P5155。3.根据权利要求1所述的一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒，其特征在于：所述的同位素内标为：氘代烟酸，CAS号：66148-15-0，纯度98％；氘代烟酰胺；13C,15N代泛酸，CAS号：137-08-6，纯度>97％。4.根据权利要求2所述的一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒，其特征在于：还包括由维生素标准品配置成标准溶液，标准溶液的配置过程如下：称取适量的烟酸，烟酰胺，泛酸标准品，加入50g/L三氯乙酸溶解，分别配制得到浓度为150μg/mL，700μg/mL，400μg/mL的烟酸、烟酰胺、泛酸标准溶液储备液，储存于-20℃冰箱中；用50g/L三氯乙酸分别将以上述三种溶液储备液配制成浓度为5μg/mL的二级溶液，然后再使用3种二级溶液配制得到烟酸/烟酰胺/泛酸浓度分别为0.5/2/1，1/4/2，2.5/10/5，5/20/10，25/100/50，50/200/100，80/320/160，100/400/200ng/mL的标准溶液工作液混合液和1.5/6/3，30/120/60，75/300/150ng/mL的质控溶液混合液，储存于-20℃。5.根据权利要求3所述的一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒，其特征在于：还包括配置内标工作溶液，内标溶液的配置过程如下：称取适量的氘代烟酸，氘代烟酰胺，13C,15N代泛酸，加入50g/L三氯乙酸溶解，分别配制得到浓度为160μg/mL，90μg/mL，135μg/mL的氘代烟酸，氘代烟酰胺，13C,15N代泛酸标准溶液储备液，储存于-20℃冰箱中；取上述内标标准溶液储备液配制成氘代烟酸，氘代烟酰胺，13C,15N代泛酸浓度为50/100/100ng/mL的内标工作溶液，储存于-20℃冰箱中。6.根据权利要求1所述的一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒，其特征在于：所述的干血点制备具体为，用75％酒精棉片消毒手指指腹，待酒精挥干后，用一次性采血针刺破皮肤，用毛细采血管采集50μL全血滴于DBS卡片上，暗处静置1-2小时阴干后置于避光密封袋内保存。7.根据权利要求5所述的一种同时定量检测烟酸、烟酰胺和泛酸的试剂盒，其特征在于：所述的干血点前处理和检测步骤具体为，取干血点，分别加入内标溶液50μL，200g/L三氯乙酸水溶液450μL，涡旋并使液面浸泡过干血片，