一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109206504A(43)申请公布日2019.01.15(21)申请号201811211533.9(22)申请日2018.10.17(71)申请人云南师范大学地址650000云南省昆明市一二一大街298号(72)发明人朱万龙王政昆张浩(74)专利代理机构北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙)11504代理人毛雨田(51)Int.Cl.C07K14/795(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书1页说明书7页(54)发明名称一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法(57)摘要本发明具体涉及一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，属于藻蓝蛋白的纯化方法技术领域。具体包括如下步骤：取螺旋藻与提取剂混合研磨、超声波破碎、离心得到第一次提取液与沉淀，将沉淀与提取剂混合超声波破碎、离心得到第二次提取液，第二次提取液与第一次提取液混合得到提取液，向所述提取液中加入硫酸铵溶液高速离心，再向上清液中加入硫酸铵使得溶液中硫酸铵的质量分数为55%以上中速离心后取沉淀，将沉淀加入溶解剂进行溶解后高速离心，微孔过滤，双水相体系分离，离子交换柱进行纯化。本发明解决了现有技术中操作步骤复杂、操作周期长以及纯度不够的问题，具有纯化效果好、周期短以及收率高的优点。CN109206504ACN109206504A权利要求书1/1页1.一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、取螺旋藻与提取剂混合后进行研磨至少30min，再采用超声波破碎，加入离心机中离心得到第一次提取液与沉淀，待用；步骤二、将步骤一中的沉淀与提取剂混合后进行超声波破碎，加入离心机中离心得到第二次提取液，将第二次提取液与第一次提取液混合得到提取液，待用；步骤三、向所述提取液中加入质量分数为40%的硫酸铵溶液进行高速离心，高速离心后取上清液，再向上清液中加入硫酸铵使得溶液中硫酸铵的质量分数为55%以上，中速离心后取沉淀，待用；步骤四、向步骤三中的沉淀中加入溶解剂进行溶解后高速离心，离心后的上清液采用微孔滤膜进行过滤，将滤液再加入双水相体系中进行分离，再经过离子交换柱进行纯化得到高纯度藻蓝蛋白。2.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤一中螺旋藻与提取剂的添加重量比为1：（3-5），超声波破碎的时间为10-12min，超声温度为0-4℃，离心转速为12000-15000r/min，离心时间为30-40min，离心温度为0-4℃。3.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤二中沉淀与提取剂的添加重量比为1：（1.5-2.0），超声波破碎的时间为3-5min，超声温度为0-4℃，离心转速为12000-15000r/min，离心时间为15-20min，离心温度为0-4℃。4.根据权利要求1-3任一项所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述提取剂为0.1-0.5mol/L的磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液的pH为7.0。5.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤三中高速离心转速为12000-15000r/min，高速离心时间为30-40min，中速离心转速为8000-10000r/min，中速离心时间为30-40min。6.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤四中沉淀与溶解剂的添加重量比为1：（2.0-2.5），高速离心的转速为12000-15000r/min，高速离心时间为30-40min，高速离心温度为0-4℃。7.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述溶解剂为0.001-0.005mol/L的磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液的pH为7.0。8.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤四中微孔滤膜的孔径为0.22μm。9.根据权利要求1所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤四中双水相体系中聚乙二醇的质量分数为12.28%，双水相体系中磷酸缓冲液的质量分数为11.63%。10.根据权利要求9所述的一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液的摩尔浓度为0.001-0.005mol/L。2CN109206504A说明书1/7页一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法技术领域[0001]本发明属于藻蓝蛋白的纯化方法技术领域，具体涉及一种高纯度藻蓝蛋白的分离纯化方法。背景技术[0002]藻蓝蛋白是从螺旋藻中分离出的一种深蓝色粉末。主要存在于蓝藻、红藻和隐藻中。藻