一种鼠李糖脂酸沉淀的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号CN109265500B(45)授权公告日2022.02.22(21)申请号201811071999.3(56)对比文件CN101613(22)申请日2018.09.14381A,2009.12.30CN101787057A,2010.07.28(65)同一申请的已公布的文献号CN108191930A,2018.06.22申请公布号CN109265500AEP0317036A1,1989.05.24(43)申请公布日2019.01.25田静等.“鼠李糖脂生物表面活性剂及其纯(73)专利权人南京工业大学化方法研究进展”.《化学与生物工程》.2010,第地址211816江苏省南京市浦口区浦珠南27卷(第6期),第13-16页.路30号齐香君等.“定量测定铜绿假单孢菌发酵液中鼠李糖脂的方法学研究”.《陕西科技大学学(72)发明人董维亮薛瑞周杰姜岷徐宁报》.2010,第28卷(第6期),第39-42页.(74)专利代理机构江苏致邦律师事务所32230审查员汪国进代理人徐蓓尹妍(51)Int.Cl.C07H15/04(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种鼠李糖脂酸沉淀的方法(57)摘要本发明涉及一种鼠李糖脂酸沉淀的方法，采用离心的方法去除菌体，收集上清液，然后将收集的上清液置于水浴锅中水浴除蛋白，采用离心的方法去除沉淀的蛋白，收集上清液，加入磷酸调节pH至2让鼠李糖脂析出，产生沉淀，在4℃静置18h。最后经过离心收集鼠李糖脂沉淀。本发明的方法通过水浴去蛋白结合磷酸沉淀获取鼠李糖脂，鼠李糖脂回收率高、纯度高，此外，本发明的方法操作简单、经济，高效，适合工业化的批量生产。CN109265500BCN109265500B权利要求书1/1页1.一种鼠李糖脂酸沉淀的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将鼠李糖脂发酵液置于离心管中10000rpm，4℃条件下离心20min富集菌体，收集无菌的发酵液上清液；(2)将步骤(1)中收集的发酵液上清液置于水浴锅中，90℃水浴60min；(3)将(2)中水浴处理后的发酵液上清液置于离心管中6000rpm，4℃条件下离心10min富集蛋白，收集上清液；(4)将(3)中收集的上清液量取体积，加入分析纯级的磷酸调节至pH＝2，在4℃下静置3‑18h使鼠李糖脂析出，产生沉淀；(5)将(4)中产生沉淀的发酵液置于离心管中6000rpm，4℃条件下离心10min富集鼠李糖脂沉淀，测量上清液的鼠李糖脂浓度计算鼠李糖脂回收率，将所得的固体烘干，得到鼠李糖脂酸沉淀产品。2.根据权利要求1所述的一种鼠李糖脂酸沉淀方法，其特征在于，所述离心管为尖底离心管。3.根据权利要求1所述的一种鼠李糖脂酸沉淀方法，其特征在于，还包括：取步骤(1)的发酵液上清液和步骤(5)中离心后的上清液，加入定量蒽酮硫酸试剂，沸水浴反应10min，控制紫外波长为620nm，利用酶标仪测试发酵液吸光度，代入用标准鼠李糖制作的标准曲线中计算鼠李糖脂浓度，计算鼠李糖脂损失率。4.根据权利要求1所述的一种鼠李糖脂酸沉淀方法，其特征在于，还包括：取步骤(5)得到鼠李糖脂酸沉淀产品，纯水溶解，使用蒽酮比色法测量溶液中鼠李糖脂溶液，计算鼠李糖脂纯度。2CN109265500B说明书1/4页一种鼠李糖脂酸沉淀的方法技术领域[0001]本发明涉及到一种鼠李糖脂的酸沉淀方法。背景技术[0002]鼠李糖脂是一种性能优良的生物表面活性剂，无毒、易生物降解，鼠李糖脂可用作乳化剂、破乳剂、功能性食品添加剂、洗涤剂和环境污染修复剂等，在农用化学品、食品饮料、化妆品和药品、环境污染治理、采矿冶金和石油石化工业等领域具有良好的应用前景，然而鼠李糖脂的分离一直是很棘手的难题，酸沉淀是普遍使用的一种方法，然而就酸沉淀本身仍然存在很多亟待的问题。[0003]目前对鼠李糖脂的研究多集中于提高产率上及其应用效果上，在提取工艺方面的研究较少。酸沉淀是对于鼠李糖脂分离普遍适用的方法，因为其有简便、高效、回收率高等优点。现有的酸沉淀方法主要使用盐酸，硫酸调节pH，这些提取方法都存在着一些缺陷。其中盐酸是一种挥发性极强的酸，在使用过程中存在安全隐患。同时盐酸水溶液中含有氯离子，氯离子是化妆品中检测的指标之一，使用盐酸调节pH，会造成产品氯离子含量超标，使产品品质下降，而硫酸是一种强腐蚀酸，在使用过程中存在安全隐患。发明内容[0004]本方法目的就在于克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种简便、经济、高效的鼠李糖脂酸沉淀方法。[0005]本发明的目的可通过以下技术方案来实现：[0006]一种鼠李糖脂酸沉淀的方法，包括如下步骤：[0007]（1）将鼠李糖脂发酵液置于离心管中离心富