一种槲皮素糖苷的制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109266708A(43)申请公布日2019.01.25(21)申请号201811140494.8(22)申请日2018.09.28(71)申请人江南大学地址214122江苏省无锡市蠡湖大道1800号(72)发明人窦文芳叶静斯(74)专利代理机构苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙)32257代理人查杰曹成俊(51)Int.Cl.C12P19/60(2006.01)C12P19/18(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表2页附图6页(54)发明名称一种槲皮素糖苷的制备方法(57)摘要本发明公开了一种槲皮素糖苷的制备方法，属于酶催化技术领域。本发明通过槲皮素与糖基供体在溶液中，在序列如SEQIDNO.1所示的糖基转移酶作为催化剂的作用下发生糖基化反应得到槲皮素糖苷。本发明的糖基转移酶催化槲皮素糖基化底物和产物的专一性都较强，生成的产物为单一产物，这为后续的分离纯化提供了有利的条件。所得到的槲皮素糖苷，水溶性高，并且保留了天然槲皮素的生物活性，克服了天然槲皮素水溶性低，在人体内吸收率低，治疗效果不明显等缺点。CN109266708ACN109266708A权利要求书1/1页1.一种槲皮素糖苷的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：槲皮素与糖基供体在溶液中在催化剂的作用下发生糖基化反应得到槲皮素糖苷，其中所述催化剂为糖基转移酶，序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的糖基供体为UDP-葡糖糖、UDP-N乙酰-D葡萄糖中的一种或两种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述溶液为pH为5～9的缓冲溶液。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述槲皮素的浓度为0.01～10％(w/v)。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述糖基供体的浓度为0.01～10％(w/v)。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，糖基转移酶的添加量为不低于0.01mg/L。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，糖基化反应温度为20～40℃。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，糖基化反应时间为12～36h。9.一种权利要求1～8任一项所述的方法制备得到的槲皮素糖苷。10.权利要求9所述的槲皮素糖苷在食品、药品、保健品中的应用。2CN109266708A说明书1/4页一种槲皮素糖苷的制备方法技术领域[0001]本发明涉及一种槲皮素糖苷的制备方法，属于酶催化技术领域。背景技术[0002]槲皮素是人类植物性食物和药物成分中最常见、分布最广泛的黄酮之一，为黄酮醇类化合物，普遍存在于茶叶、洋葱、生菜、卷心菜、西兰花、豆类、苹果、桃子、荞麦等几乎所有的植物性食物中，也是许多中草药如银杏叶、桑寄生等的有效成分，是多酚物质中重要的抗氧化剂之一，具有抗病毒、抗菌、抗炎等作用，并通过诱导变异细胞凋亡、抑制DNA合成和肿瘤细胞生长，下调和修饰细胞信号转导通路等，产生积极的抗癌作用。各种流行病学调查结果也支持槲皮素及其糖苷衍生物的摄入量与健康保护效应之间的关系，这种保护作用包括预防各种疾病，如心血管疾病、骨质疏松症、肺部疾患、某些癌症以及抗衰老等。[0003]槲皮素分子具有高度亲脂性，几乎不溶于水，可溶于冰醋酸、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、吡啶、丙酮等溶剂，不溶于乙醚、苯、氯仿、石油醚等。而槲皮素糖苷衍生物的糖基基团则可以增加槲皮素衍生物的亲水性。这种由亲脂性向亲水性的改变，可使槲皮素更容易输送到植物各部分的胞质中，利于储存并增加稳定性，具有重要的生物学意义。[0004]由于化学方法缺乏区域和立体化学选择性，传统的化学法糖基化修饰技术一直是困扰化学家的难题。酶催化具有自己独特的特点，酶催化剂反应条件温和，具有很高的区域选择性和立体选择性，并且反应大多数可在水中进行。随着制药工业对手性化合物的需求日益增长，和人类环保意识的增加酶催化工艺作为一种绿色的手性技术已成为目前化学制药领域中研究和应用的热点之一。Ko等以来源于蜡状芽孢杆菌的糖基转移酶(BcGT-1)对槲皮素进行糖基化反应，糖基化位置在槲皮素3位及7位羟基，该转化体系以UDP-葡萄糖为糖基供体，槲皮素(30mg·L-1)为糖基受体，分别得到槲皮素-3-O-葡萄糖苷和槲皮素-7-O-葡萄糖苷。Lim等以来源于拟南芥的尿苷二磷酸葡萄糖糖基转移酶(UGT)对槲皮素进行糖基化反应，该转化反应以UDP-葡萄糖为糖基供体，糖基化位置分别在槲皮素的3、7、3'和4'位羟基，得到6种不同的糖基化产物。现有的可用来催化槲皮素糖基化的糖基转移酶种类相对较少，并且产物专一性较弱，一般得到的产物为多个不同位点催化产物，给后续的分离纯化带来了很多困难，不利用工业生产应用。发明内容[0005]为解决上述问题