将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109651482A(43)申请公布日2019.04.19(21)申请号201910062587.1(22)申请日2019.01.23(71)申请人荆门市锦绣天成医药技术服务有限公司地址448001湖北省荆门市东宝区泉口路9号丁香园小区菊园5栋二单元601室(72)发明人张秀梅(74)专利代理机构荆门市首创专利事务所42107代理人裴作平(51)Int.Cl.C07J17/00(2006.01)C07J71/00(2006.01)C12P33/20(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法(57)摘要本发明公开了将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法，通过将植物经过湿法粉碎，分离，得到的混悬液中的水溶性F环开环的呋喃甾体皂苷，通过加无机酸水解关闭F环转化成螺旋甾体皂苷；药渣再加水（或者含硫酸铵或者含硫酸镁的水）发酵，使植物组织疏松进而有利于水不溶性的螺旋甾体皂苷的释放；然后常规酸水解，得到理论收率的皂素；或者用含有苦杏仁酶或者蜗牛酶的水对植物组织进行常规酶解，关闭F环转化成螺旋甾体皂苷，然后再常规酸水解，得到理论收率的相应皂素。CN109651482ACN109651482A权利要求书1/1页1.将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法，所述植物为含有呋喃甾体皂苷的植物，其特征在于包括以下步骤：S1、将植物粉碎后进行初次水解，初次水解为酸水解或酶水解；S2、然后将初次水解的产物再进行二次水解，二次水解为酸水解；S3、二次水解得到的产物经脱酸，烘干，再加有机溶剂索氏提取，浓缩后结晶，烘干，即得到所述螺旋甾体皂苷元。2.根据权利要求1所述的将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法，其特征在于S1中初次水解中酸水解步骤具体为：T1、将植物湿法粉碎，分离得到混悬液与药渣，湿法粉碎的介质为水；T2、对所述混悬液进行酸水解，得到混悬水解液，酸的加入量为0.1~4mol/L；T3、对所述药渣用40~62℃温度的水进行温浸24~74h，得到药渣温浸液；T4、将所述混悬水解液和药渣温浸液合并后即为初次水解的产物。3.根据权利要求2所述的将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法，其特征在于T3中对所述药渣进行温浸的水中还可加入硫酸铵或硫酸镁，硫酸铵或硫酸镁的用量为5~10nmol/L。4.根据权利要求1所述的将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法，其特征在于S1中初次水解中酶水解步骤具体为：将植物湿法粉碎，湿法粉碎的介质为含苦杏仁酶的水或含蜗牛酶的水，酶的加入量为4-6mg/Kg，然后于28~35℃温浸24~72h，即得到初次水解的产物。5.根据权利要求1所述的将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法，其特征在于S2中二次水解的具体步骤为：调节初次水解的产物中酸含量，使酸浓度达到1.5mol/L，然后常压下水解4~6h或加压水解1~3h，即完成所述二次水解。6.根据权利要求1所述的将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法，其特征在于S3中所述有机溶剂为120号汽油。2CN109651482A说明书1/4页将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷元的方法技术领域[0001]本发明涉及化学原料药领域，具体来说是将植物体内呋喃甾体皂苷转变成螺旋甾体皂苷的方法。背景技术[0002]多年来，由于呋喃甾体皂苷极性大，不易结晶，难以分离纯化，故不易确定结构；另一方面，未认识到植物体内的酶对原皂苷的水解作用（天然产物化学，徐任生主编，科学出版社1993年一版，561页）。所以在我国60年的薯蓣皂素的生产中一致采用发酵-水解的工艺来产生皂素。近年来由于环境保护的原因，采用了一些新工艺比如酶法、微生物法、直接分离、膜分离、超声波法、微波法、加表面活性剂法、水解原位萃取法来生产皂素，但均未能实施工业化生产。（赵国强：黄姜皂素提取工艺改进和皂苷转化菌株的筛选。2018，湖北工业大学硕士研究生论文）它们均未涉及对呋喃甾体皂苷转化成螺旋甾体皂苷元的方法研究。而当呋喃甾体皂苷转化成螺旋甾体皂苷后再水解就得到了理论收率的皂素。不进行此转化就有约30%的假薯蓣皂素苷元产生，既降低了薯蓣皂素的熔点又不利于后续的双烯生产。[0003]金明等人的研究表明，盾叶薯蓣（黄姜）中存在大量的呋喃甾体皂苷（金明等：盾叶薯蓣中甾体皂苷的分离与结构鉴定，西北药学杂志，2017年，32（4）395-399）。而长期以来我国采用盾叶薯蓣（黄姜）来生产皂素的工艺，其中一个问题是收率低。其原因就是未能将体内的呋喃甾体皂苷彻底转化成螺旋甾体皂苷。尽管荣先冬等人用硫酸浸泡法提取薯蓣皂苷元进行了研究（安徽理工大学学