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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109705177A(43)申请公布日2019.05.03(21)申请号201811581637.9C12Q1/40(2006.01)(22)申请日2018.12.24(71)申请人郑州安图生物工程股份有限公司地址450016河南省郑州市经济技术开发区经开第十五大街199号(72)发明人朱飞飞杨书彬马建军杨红云张中洲马沛燃范围付光宇吴学炜(74)专利代理机构郑州异开专利事务所(普通合伙)41114代理人王霞(51)Int.Cl.C07H17/02(2006.01)C07H15/203(2006.01)C07H1/00(2006.01)权利要求书3页说明书7页附图2页(54)发明名称一种底物及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一类用于检测α-葡萄糖苷酶活性的底物--α-D-葡萄糖苷,本发明还公开了该底物的合成工艺:首先将化合物α-D-葡萄糖与乙酰氯反应,经纯化得到α-D-五乙酰葡萄糖;所得物经N,N-二甲基-1,3-二氨基丙烷催化,酸洗、萃取、干燥、纯化得到2,3,4,6-四-O-α-D-乙酰基葡萄糖;所得物在二氯甲烷溶液中经催化与三氯乙腈反应,过滤、纯化得到2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-葡萄糖基三氯乙酰亚胺;所得物在二氯甲烷溶液中经催化与色原或荧光基团反应,萃取,合并有机相,干燥、浓缩、甲醇复溶、4℃养晶过滤,得到2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-葡萄糖苷;所得物在甲醇溶液中催化,反应完成后脱色吸附、过滤、纯化制得。本发明底物的合成工艺简单,收率高,可提高试剂盒灵敏度,稳定性好,特异性强。CN109705177ACN109705177A权利要求书1/3页1.一种底物,其特征在于:所述底物的结构式为:,其中,R为吲哚衍生物、硝基苯及其衍生物、萘衍生物、苯胺衍生物或香豆素衍生物中之一。2.根据权利要求1所述的底物,其特征在于:所述R为吲哚衍生物时,其底物的结构式为:,式中的RⅠ-1选自氢、甲基、乙基中其中之一;RⅠ-2~RⅠ-5各自独立选择氢、C1~C3烷基或卤素中其中之一。3.根据权利要求1所述的底物,其特征在于:所述R为硝基苯及其衍生物时,其底物的结构式为:式中的RⅡ-1~RⅡ-5各自独立选择氢、C1~C3烷基或硝基中其中之一。4.根据权利要求3所述的底物,其特征在于:式中的RⅡ-1~RⅡ-5中包含一个硝基。5.根据权利要求1所述的底物,其特征在于:所述R为萘衍生物时,其底物的结构式为:2CN109705177A权利要求书2/3页或,式中RⅢ-1~RⅢ-4各自独立选择氢、C1~C3烷基或卤素中其中之一。6.根据权利要求1所述的底物,其特征在于:所述R为苯胺衍生物时,其底物的结构式为:式中RⅣ-1~RⅣ-5各自独立选自氢、C1~C3烷基或氨基中其中之一。7.根据权利要求6所述的底物,其特征在于:所述RⅣ-1~RⅣ-5中包含一个氨基。8.根据权利要求1所述的底物,其特征在于:所述R为香豆素衍生物时,其底物的结构式为:或式中RⅤ-1~RⅤ-5各自独立选择氢或C1~C3烷基。9.权利要求1-8中任一项底物的制备方法,其特征在于:包括下述具体步骤:第一步,将化合物α-D-葡萄糖与乙酰氯于室温下反应,反应完成后,减压浓缩除去溶剂,经柱层析纯化得到化合物α-D-五乙酰葡萄糖,备用;第二步,将第一步所得化合物在乙腈溶液中经N,N-二甲基-1,3-二氨基丙烷催化反应,反应完成后经盐酸酸洗、乙酸乙酯萃取、无水硫酸钠干燥、柱层析纯化得到化合物2,3,4,6-3CN109705177A权利要求书3/3页四-O-α-D-乙酰基葡萄糖,备用;第三步,将第二步所得化合物在二氯甲烷溶液中经碳酸钾催化与三氯乙腈反应,反应完成后经过滤、柱层析纯化得到化合物2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-葡萄糖基三氯乙酰亚胺,备用;第四步,将第三步所得化合物在二氯甲烷溶液中,在氩氛保护下,经三氟化硼乙醚催化与色原或荧光基团反应,反应完成后经饱和食盐水、二氯甲烷萃取,合并有机相,干燥、浓缩、甲醇复溶、4℃养晶2小时过滤,得到化合物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-葡萄糖苷,备用;第五步,第四步所得化合物在甲醇溶液中经甲醇钠催化反应,反应完成后经活性炭脱色吸附、过滤、柱层析纯化制得α-D-葡萄糖苷底物化合物。10.权利要求1-8中任一项底物在检测α-葡萄糖苷酶活性中的应用。4CN109705177A说明书1/7页一种底物及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物化学医药技术领域,尤其是涉及一种底物,本发明还涉及该底物的制备方法,以及该底物在检测α-葡萄糖苷酶活性方面的应用。背景技术[0002]目前,酶类测定是临床生化检验中常做的项目之一。α-葡萄糖苷酶为水解酶的