固相萃取-高效液相色谱测定婴幼儿米粉中烟酸、烟酰胺的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111272912A(43)申请公布日2020.06.12(21)申请号202010199038.1(22)申请日2020.03.20(71)申请人山东省食品药品检验研究院地址250101山东省济南市高新技术开发区新泺大街2749号(72)发明人尹丽丽李珊郑红刘艳明周传静程志薛霞(74)专利代理机构济南泉城专利商标事务所37218代理人王翠翠(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/34(2006.01)G01N30/74(2006.01)G01N30/89(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图3页(54)发明名称固相萃取-高效液相色谱测定婴幼儿米粉中烟酸、烟酰胺的方法(57)摘要本发明公开了一种固相萃取-高效液相色谱测定婴幼儿米粉中烟酸、烟酰胺的方法，以EDTA-NaCl混合溶液为提取液，首次使用亲水亲脂平衡（HLB）固相萃取柱净化，以20mmol/L甲酸铵（pH4.5）为流动相，AtlantisT3色谱柱上梯度洗脱分离，在261nm检测紫外吸收的方法。本方法提取效率高、净化效果好、分离度高、分析时间短，线性范围为0.3-30.0mg/L、检测限（0.3mg/kg）与定量限（1mg/kg）较低、回收率在93.3%~102.5%范围内。方法精密度高、稳定性与重现性好。有较高的实用价值，可应用于各种婴幼儿米粉中烟酸与烟酰胺的测定。CN111272912ACN111272912A权利要求书1/1页1.一种固相萃取-高效液相色谱测定婴幼儿米粉中烟酸、烟酰胺的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品前处理：准确称取米粉试样1.0g于50mL离心管中，加入30mL混合提取液，混匀；将离心管置于超声波清洗器中，超声10min后用水定容至刻度，混匀得到处理液，6000r/min，离心5min，得到上清液；（2）HLB固相萃取柱经4mL甲醇、4mL水活化后，移取5mL上清液上柱，用2mL水淋洗后抽干，再用4mL甲醇洗脱，收集洗脱液，用水定容至5mL，混匀后过0.22μm滤膜；（3）烟酸、烟酰胺标准溶液的配制，绘制标准曲线；（4）将净化后的液体上机进行高效液相色谱检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的混合提取液为5mmol/LEDTA与1mol/LNaCl的混合溶液。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的色谱柱：AtlantisT3（5μm，4.6×250mm）；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；波长：261nm；流动相A：甲酸铵（20mmoL/L，pH4.5）；流动相B：甲醇；梯度洗脱条件见表1；T/minA/%B/%0.0100.00.08.0100.00.020.080.020.025.040.060.025.1100.00.030.0100.00.0。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的HLB固相萃取柱为OasisHLB-SPE柱。2CN111272912A说明书1/7页固相萃取-高效液相色谱测定婴幼儿米粉中烟酸、烟酰胺的方法技术领域[0001]本发明属于，具体涉及一种固相萃取-高效液相色谱测定婴幼儿米粉中烟酸、烟酰胺的方法。背景技术[0002]烟酸与烟酰胺，又称维生素B3或维生素PP，是一类人体中不可缺少的水溶性维生素。烟酸与烟酰胺参与多种生理活动，发挥着重要的生物功能，因此经常作为婴幼儿配方食品中的营养添加剂。烟酸与烟酰胺的缺乏可能引发糙皮病等缺乏症，但过量摄入则会引起血管舒张、胃肠道不适以及肝毒性等副反应，我国对烟酸限量进行了要求，如国家标准GB10769-2010中对婴幼儿谷类辅助食品添加量为≥83.7ug/100kJ。[0003]婴幼儿米粉作为一种重要的辅食，是婴幼儿所需能量的主要来源之一[9]。但检测婴幼儿米粉中的烟酸和烟酰胺存在各种困难。首先，婴幼儿米粉基质复杂。米粉中以大米、小米等为主要成分，可加入水果、蔬菜、肉蛋等辅助原料，并添加多种营养物质，含有碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素等多种物质，导致米粉基质较为复杂。淀粉在米粉中的含量较高，但是因其分子量较大，在冷水中溶解度较差，在提取过程中，悬浮的淀粉颗粒可能会吸附目标物，影响提取效率。其他物质如蛋白质、脂肪的存在同样会影响提取的效果。因此，在如此复杂的基质中提取水溶性维生素烟酸烟酰胺，需要全面的考虑作为杂质的其他成分的性质，选择恰当的提取和净化方法，为定性定量分析烟酸与烟酰胺奠定基础。其次，目标分析物性质差异大，同时提取和净化困难。烟酸结构为吡啶环的三位羧基取代，呈弱酸性；烟酰胺是烟酸的酰胺化产物，与烟酸结构相似，但是烟酰胺则呈近中性或弱碱性。两者在化学性质上的明显差异，导致同时分析两种物质存