基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM-ScFv抗体的多肽序列及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111718397A(43)申请公布日2020.09.29(21)申请号202010427060.7G01N33/68(2006.01)(22)申请日2020.05.19(71)申请人新乡学院地址453003河南省新乡市红旗区金穗大道东段191号(72)发明人王选年岳锋司艳芳郭东光齐永华潘鹏涛李鹏孙国鹏朱艳平(74)专利代理机构北京中建联合知识产权代理事务所(普通合伙)11004代理人王灵灵(51)Int.Cl.C07K7/08(2006.01)C07K7/06(2006.01)G01N33/53(2006.01)权利要求书1页说明书5页序列表1页附图4页(54)发明名称基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM-ScFv抗体的多肽序列及其应用(57)摘要基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM‑ScFv抗体的多肽序列及其应用，多肽序列的重链可变区的氨基酸序列为如SEQIDNO.1所示序列：ARWTVITYAMDY，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示序列：QNGHSFPYT，多肽序列在西马特罗抗原鉴定中的应用。本发明对获得的单链抗体进行质量评价，四轮筛选中噬菌体回收率一直呈增加的趋势，说明随着淘选次数的增加，特异性的噬菌体抗体得到了有效富，与西马特罗抗原进行亲和力鉴定，亲和力较好，可应用于西马特罗抗原的快速检测试剂的生产中，丰富西马特罗等β2型受体激动剂的残留检测方法，为进一步制备西马特罗的抗体和抗体进化奠定物质基础，为西马特罗等非法添加物的控制使用提供参考，以满足公众对无残留动物肉制品的要求。CN111718397ACN111718397A权利要求书1/1页1.基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM-ScFv抗体的多肽序列，其特征在于：所述多肽序列的重链可变区的氨基酸序列为如SEQIDNO.1所示序列：ARWTVITYAMDY，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示序列：QNGHSFPYT。2.如权利要求1所述的CIM-ScFv抗体的多肽序列在西马特罗抗原鉴定中的应用。3.如权利要求1所述的CIM-ScFv抗体的多肽序列在西马特罗抗原的快速检测中的应用。4.如权利要求1所述的CIM-ScFv抗体的多肽序列在制备用于检测样品中西马特罗残留的试剂盒中的用途。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述样品包括但不限于动物组织、尿液和饲料。6.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述试剂盒包括但不局限ELISA试剂盒。7.如权利要求1所述的CIM-ScFv抗体的多肽序列在免疫相关诊断产品中的应用。8.如权利要求7所述应用，其特征在于：所述免疫相关诊断产品包括但不限WB试剂盒、ELISA试剂盒、胶体金试剂条和荧光诊断试剂。2CN111718397A说明书1/5页基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM-ScFv抗体的多肽序列及其应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体属于基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM-ScFv抗体的多肽序列及其应用。背景技术[0002]西马特罗（CIM），不法饲养企业常用其代替克罗特伦作为新型“瘦肉精”使用。已经证明，CIM药物残留在动物食用组织（如肺，肝，肾和肌肉等）会对消费者健康构成潜在风险。CIM作为家畜生长促进剂的用途在许多国家和地区已被禁止，但是为了提高经济利润，滥用CIM的行为在各地仍然很普遍。为了辅助解决食品安全问题及改善非法添加物在我国明令禁止而屡禁不止的现象，继续完善药残监控体系，本研究基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM-ScFv抗体的多肽序列，旨在丰富西马特罗等β2型受体激动剂的残留检测方法，为西马特罗农兽药残留的免疫学检测试剂的制备提供原材料，而为其他小分子半抗原的重组抗体的研制奠定科学的基础，为进一步制备西马特罗的抗体和抗体进化奠定物质基础，为西马特罗等非法添加物的控制使用提供参考，以满足公众对无残留动物肉制品的要求。发明内容[0003]本发明的目的是提供基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM-ScFv抗体的多肽序列及其应用，本发明首先制备鼠源单克隆抗体库，以期从中筛选出抗西马特罗重组抗体，通过可溶性ScFv的竞争抑制ELISA标准曲线结果，表明带有该多肽序列的噬菌体抗体与相应靶标抗原在3~243ng/mL范围内有良好的拟合程度，由此证明，本发明设计的多肽序列，可用于对西马特罗药物残留进行定量和定性的快速检测。[0004]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：基于鼠源天然单链抗体库筛选识别CIM-ScFv抗体的多肽序列，其特征在于：所述多肽序列的重链可变区的氨基酸序列为如SEQIDNO.1所示序列：ARWTVITYAMDY，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示序列：QNGHSFPY