鼠源天然抗体噬菌体展示文库的构建及抗草鱼1gM的单链抗体的淘选的中期报告.docx

鼠源天然抗体噬菌体展示文库的构建及抗草鱼1gM的单链抗体的淘选的中期报告
该项目的中期报告主要涉及鼠源天然抗体噬菌体展示文库的构建和抗草鱼1gM的单链抗体的淘选情况。
一、鼠源天然抗体噬菌体展示文库的构建
该文库是利用鼠的B细胞转录本为模板，获得鼠源天然抗体的DNA，然后将其连接到噬菌体表面展示子上。具体步骤如下：
1.B细胞转录本的制备：从鼠的淋巴结或脾脏中提取RNA，并进行反转录，得到cDNA。
2.天然抗体的PCR扩增：利用PCR方法扩增鼠源天然抗体的DNA，得到VH和VL区域的DNA片段。
3.连接到噬菌体表面展示子上：将VH和VL区域的DNA片段连接到噬菌体表面展示子上。此步骤中，需要利用限制性内切酶进行切割和连接，并进行DNA测序验证。
目前，该文库已经构建完成，并进行了初步测序验证。
二、抗草鱼1gM的单链抗体的淘选
该研究旨在通过对鼠源天然抗体噬菌体展示文库的筛选，获得能够特异性识别草鱼1gM的单链抗体。淘选步骤如下：
1.噬菌体展示文库的包装：将文库的DNA片段打入噬菌体，并进行包装。
2.特异性筛选：利用草鱼1gM进行特异性筛选。将噬菌体展示文库与草鱼1gM结合，然后进行洗涤和逐步稀释，筛选出高亲和力的单链抗体。
3.单链抗体的鉴定：通过ELISA和Westernblotting方法，对获得的单链抗体进行筛选和鉴定。
目前，已经完成了第一轮筛选工作，成功筛选出数十个潜在的抗体候选物。下一步将深入挖掘并研究这些抗体，以期获得一种特异性强、亲和力高的单链抗体。