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鼠源天然抗体噬菌体展示文库的构建及抗草鱼1gM的单链抗体的淘选
摘要
抗体是免疫系统第一道防线，鼠源天然抗体噬菌体展示文库是一种有效的高通量筛选出特异性单链抗体的方法。本文通过文献调研介绍了噬菌体展示文库的构建流程，并以抗草鱼1gM的单链抗体为例讲述了其在鼠源天然抗体噬菌体展示库中的淘选过程及后续鉴定工作。该方法具有快速、高效、低成本和易推广等优点，可应用于医药、生物学和基础研究领域。
关键词：噬菌体展示文库；单链抗体；抗草鱼1gM；淘选；鉴定
Abstract
Antibodiesarethefirstlineofdefenseintheimmunesystem,andthephagedisplaylibraryofnaturalantibodiesfrommiceisaneffectivehigh-throughputmethodofscreeningspecificsingle-chainantibodies.Thisarticleintroducestheconstructionprocessofthephagedisplaylibrarythroughliteraturereview,andtakesthescreeningprocessandsubsequentidentificationworkofsingle-chainantibodiesagainstgrasscarp1gMasanexample.Themethodhastheadvantagesoffast,efficient,lowcostandeasypromotion,andcanbeappliedinthefieldsofmedicine,biologyandbasicresearch.
Keywords:Phagedisplaylibrary；Single-chainantibody；Grasscarp1gM；Screening；Identification
一、绪论
抗体是人体在感染过程中最主要的免疫防御工具，其通过特异性结合病原体表面抗原，发挥差异性的中和、凝集和溶解等生物活性，保护机体免受侵害。因此，抗体不仅是临床诊断和治疗的重要工具，还是生物学、生物工程和基础科学研究的重要手段。
在过去的几十年中，以免疫细胞将抗原递呈给非细胞免疫系统为基础的单克隆抗体技术得到了广泛的应用。然而，这种技术有其缺点，如成本较高、不太适合中高通量的筛选过程、免疫原的制备过程比较复杂等。鼠源天然抗体噬菌体展示文库（phagedisplaylibraryofnaturalantibodiesfrommice）则可以解决以上问题。
噬菌体展示文库是一种通过扩增、克隆和展示非天然抗体库（或天然抗体库）的技术，用于高通量筛选出具有特异性单链抗体。本文将以抗草鱼1gM的单链抗体为例，介绍鼠源天然抗体噬菌体展示文库的构建流程、筛选方法及其优缺点，为今后类似研究提供参考。
二、鼠源天然抗体噬菌体展示文库的构建
2.1材料和方法
(1)DNA：pComb3Hphagemidvector（NewEnglandBiolabs，NEB）；PCR扩增的鼠源抗体库的cDNA。
(2)酶：EcoRI、XhoI（NEB）；AlkalinePhosphataseCalfIntestinal（CIP，NEB）。
(3)细菌：TG1。
(4)菌落PCR：T7-VL和T7-VH引物，用其从菌落中扩增出每一个片段用于检测。
(5)测试：抗体结构上的测试可用菌落PCR、ELISA等方法进行。
2.2构建流程
(1)设计引物，扩增鼠源抗体基因库的cDNA片段，加入pComb3Hvector上游的VL和VH的启动子，通过PCR扩增出VL和VH来克隆到pComb3Hphagemidvector中，被其117个KOZAK序列驱动。
(2)对PCR产物，采用EcoRI和XhoI内切酶进行限制性内切，然后加入CIP，过夜消化。
(3)加入TG1感受态细胞。
(4)在2×YT培养基中在37°C震荡过夜，提取质粒DNA。
(5)端粘贴抗体基因库到pComb3Hvector，构建抗体噬菌体展示文库。
三、抗草鱼1gM的单链抗体的筛选
3.1材料和方法
(1)材料：抗草鱼1gM抗原、抗体噬菌体展示文库、TG1感受态细胞、2×YT培养基、IPTG、X-Gal。
(2)方法：PPC、ELISA、自由溶液电泳。
3.2筛选流程
(1)抗原与抗体噬菌体展示文库的交联：将抗草鱼1gM抗原加入到ELISA板中，使其与板上呈现的抗体噬菌体展示文库交联。
(2)较弱的洗涤条件下重甜菌不粘附洗掉病原菌，把其采取用1~50高希尔折返筛选体积洗菌，洗涤总量以此浓度为准。
(3)通过多轮的洗涤使环境中的其他物种被除去，选出特异性较强的单链抗体精确