一种解淀粉芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽的分离方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112079899A(43)申请公布日2020.12.15(21)申请号202011060014.4(22)申请日2020.09.30(83)生物保藏信息CGMCCNo.200412020.06.08(71)申请人陕西科技大学地址710021陕西省西安市未央区大学园(72)发明人田露王旭阳刘荣杰龚国利(74)专利代理机构西安通大专利代理有限责任公司61200代理人范巍(51)Int.Cl.C07K1/14(2006.01)C07K1/36(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图2页(54)发明名称一种解淀粉芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽的分离方法(57)摘要本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽的分离方法，将解淀粉芽孢杆菌发酵液离心，使所得发酵清液起泡后收集并冷却泡沫，然后将由泡沫生成的无泡清液经酸沉、抽提、浓缩、干燥，得到脂肽成品，本发明通过在发酵液粗分离工艺中引入起泡操作，使发酵产生的大部分脂肽通过附着在泡沫上而简便、快速的富集。本发明的分离工艺简单，并且脂肽收率高、纯度高。CN112079899ACN112079899A权利要求书1/1页1.一种从菌体发酵液中分离抗菌脂肽的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)去除发酵液中的菌体，得到发酵清液；2)使发酵清液在加热和/或机械作用下产生泡沫，并将产生的泡沫分离，将分离的泡沫冷却直至由该泡沫生成无泡清液；3)调节无泡清液的pH值为酸性后静置；然后分离生成的沉淀物；4)将沉淀物用醇类溶剂进行抽提，然后过滤，得到滤液；5)将滤液浓缩后干燥，得到脂肽成品。2.根据权利要求1所述一种从菌体发酵液中分离抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步骤1)具体包括以下步骤：通过离心分离发酵液中的菌体后收集上清液。3.根据权利要求1所述一种从菌体发酵液中分离抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述发酵液采用的发酵菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)菌株。4.根据权利要求3所述一种从菌体发酵液中分离抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述菌株的发酵条件为：于≤48℃的温度下振荡培养≥12h。5.根据权利要求1所述一种从菌体发酵液中分离抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步骤2)具体包括以下步骤：在温度为37～45℃、压力为0.08～0.09MPa，以及转速为100～150rpm的条件下使旋转容器内的发酵清液产生泡沫并收集泡沫；将收集的泡沫于4～10℃下静置10～30min。6.根据权利要求1所述一种从菌体发酵液中分离抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步骤3)中，使用4～6mo1/LHCL调节无泡清液的pH值至1.5～2.5；静置温度为4～10℃，静置时间为8～12h。7.根据权利要求1所述一种从菌体发酵液中分离抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步骤4)中，用发酵液体积5‰～10‰的甲醇或乙醇溶解沉淀物后抽提2～3h，过滤采用0.2～0.22μm的有机滤膜。8.根据权利要求1所述一种从菌体发酵液中分离抗菌脂肽的方法，其特征在于：所述步骤5)具体包括以下步骤：将滤液蒸干后用发酵液体积5‰～10‰的水重新溶解，然后在-20℃～-80℃预冻1～2h后真空冷冻干燥。2CN112079899A说明书1/3页一种解淀粉芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽的分离方法技术领域[0001]本发明涉及微生物发酵液中抗菌脂肽的粗分离，具体涉及一种简便、有效且低成本的解淀粉芽孢杆菌发酵液处理方法。背景技术[0002]目前食品工业所使用的化学防腐剂，例如，苯甲酸、山梨醇等，影响了人类的健康，对自然环境也产生了污染。同时抗生素的广泛、大量使用，造成抗生素对致病菌的抑制作用明显降低。随着致病菌抗药能力的增强，需要开发新的抗菌物质。脂肽化合物主要表现出的特性包括抗菌、抗血凝、抗病毒、抗肿瘤、抗支原体、抗原虫以及较强的表面活性，且耐pH、耐热、临界胶束浓度较低、能螯合金属离子、易降解、不易产生耐药性等。[0003]由Arima等首次发现枯草芽孢杆菌(B.subtilis)能够产生抗菌脂肽Surfactin，进一步研究发现，解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefacierss)、凝结芽孢杆菌(B.coagularss)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、苏云金芽胞杆菌(B.lhurirsgierssis)、地衣芽孢杆菌(B.lzchemformis)、环状芽孢杆菌(B.circulars)和类芽孢杆菌(P.aersibacillus)等都能产生脂肽类化合物。虽然产生抗菌脂肽的菌株很多，但目前已报导的抗菌脂肽的产量还难以达到商品化生产的要求，抗菌脂肽提