一种提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113801186A(43)申请公布日2021.12.17(21)申请号202111188552.6(22)申请日2021.10.12(71)申请人大连工业大学地址116000辽宁省大连市甘井子区轻工苑1号(72)发明人丛丽娜关长城(74)专利代理机构沈阳一诺君科知识产权代理事务所(普通合伙)21266代理人刘丽娟(51)Int.Cl.C07K1/14(2006.01)C07K1/30(2006.01)C07K1/34(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称一种提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法(57)摘要本发明公开了一种提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法，包括：将枯草芽孢杆菌发酵液离心得到枯草芽孢杆菌发酵上清液；采用乙醇和硫酸铵配制双水相萃取体系；将枯草芽孢杆菌发酵上清液加入到双水相萃取体系，调节双水相萃取体系pH为2‑8，搅拌混合均匀，静置萃取分相，收集上相萃取液；向上相萃取液中加入其体积1‑3倍的乙醇，析出硫酸铵沉淀，将硫酸铵沉淀过滤，收集滤液；滤液使用旋转蒸发仪干燥浓缩后，得到枯草芽孢杆菌抗菌脂肽类化合物。与现有技术相比，本发明提取速度快，抗菌脂肽类化合物的收率高，且萃取后的乙醇和硫酸铵可循环使用，不会造成环境污染问题。CN113801186ACN113801186A权利要求书1/1页1.一种提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、枯草芽孢杆菌发酵培养，将枯草芽孢杆菌发酵液离心得到枯草芽孢杆菌发酵上清液；S2、采用乙醇和硫酸铵配制双水相萃取体系，其中双水相萃取体系中乙醇的体积分数为20‑40％，硫酸铵的质量分数为10‑30％；S3、将枯草芽孢杆菌发酵上清液加入到双水相萃取体系得到混合液，调节双水相萃取体系pH为2‑8，所述混合液中枯草芽孢杆菌发酵上清液的体积分数为50‑70％，搅拌混合均匀，静置萃取分相，收集上相萃取液；S4、向上相萃取液中加入其体积1‑3倍的乙醇，析出硫酸铵沉淀，将硫酸铵沉淀过滤，收集滤液；S5、将步骤S4中的滤液使用旋转蒸发仪干燥浓缩后，得到枯草芽孢杆菌抗菌脂肽类化合物。2.根据权利要求1所述的提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法，其特征在于，所述步骤S1中枯草芽孢杆菌发酵培养所用的发酵培养基每升含有以下组分：葡萄糖10.0g，牛骨蛋白胨10.0g，磷酸氢二钾5.0g，其余为水，所述发酵培养基的pH为7.0。3.根据权利要求1所述的提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法，其特征在于，所述步骤S1中，枯草芽孢杆菌发酵液离心是在转数为8000r/min的离心机中进行固液分离，离心时间10min。4.根据权利要求1所述的提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法，其特征在于，所述步骤S3中，萃取温度为20‑40℃，搅拌时间为10‑20min，搅拌机转速为100‑200rpm，静置分相时间为10‑30min。5.根据权利要求1所述的提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法，其特征在于，所述步骤S5中，旋转蒸发仪温度为60℃，压力为0.1Mpa。6.根据权利要求1所述的提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法，其特征在于，所述步骤S2中，双水相萃取体系中乙醇的体积分数为35％，硫酸铵的质量分数为20％，双水相萃取体系的pH为6。2CN113801186A说明书1/6页一种提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法技术领域[0001]本发明涉及生物工程技术领域，特别是一种提取枯草芽孢杆菌发酵液中抗菌脂肽类化合物的方法。背景技术[0002]抗菌脂肽类化合物是芽孢杆菌在生长过程中通过非核糖体途径产生的一类天然蛋白类抗菌物质，因具有无毒、无残留、无抗药性等特点，使其作为有潜力的抗生素替代品受到国内外广泛关注。目前为止，人们研究比较透彻的抗菌脂肽类化合物主要有芬荠素(Fengycin)、表面活性素(Surfaction)和伊枯草菌素(Iturin)三大类，其大多是低分子量的(300‑3000Da)脂肽类化合物，具有毒性小、可被降解、不污染环境和耐酸碱等独特的理化特性。[0003]经研究表明，芬荠素是一类抗真菌抑制剂，可用于治疗皮肤真菌病，由于它具有广谱抗真菌性、低毒和低变态反应等特点,使其成为了一种极具价值的抗真菌药物。表面活性素是一种能降低表面张力的两亲性分子，具有乳化、洗涤、杀菌、润湿、分散、低刺激性和高皮肤相容性等特性，广泛应用在日用品和化妆品领域，比如洗面奶、洗发水和牙膏等。伊枯草菌素是一种具有环脂肽结构的两亲化合物,由非极性的脂肪酸链通过结合极性的氨基酸脂肪链组成，具有表面活性、溶血、抗真菌、抗肿瘤等作用以