病毒核酸提取或保存试剂、引物探针组合、病毒扩增试剂、试剂盒及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112266986A(43)申请公布日2021.01.26(21)申请号202011532195.6C12N15/11(2006.01)(22)申请日2020.12.22C12R1/93(2006.01)(71)申请人博奥生物集团有限公司地址102206北京市昌平区生命科学园路18号(72)发明人郭弘妍王辉毛沁心陈翔徐友春王会丽邓浩浩李雅婷程京(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人张柳(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6806(2018.01)C12Q1/6844(2018.01)权利要求书3页说明书16页序列表4页附图4页(54)发明名称病毒核酸提取或保存试剂、引物探针组合、病毒扩增试剂、试剂盒及其应用(57)摘要本发明涉及病毒检测领域，特别涉及病毒核酸提取或保存试剂、引物探针组合、病毒扩增试剂、试剂盒及其应用。本发明病毒检测装置提供了一种简单易行的病毒核酸提取方法，整个过程大约5‑15分钟，回收纯化的核酸，可用于病毒核酸的检测。包括PCR、NASBA、LAMP、RPA等。相比较于传统的病毒提取方法，本方法病毒核酸回收率高、用时少、操作方便、易于临床推广。本发明涉及单管同时检测新型冠状病毒COVID‑19N和ORF基因以及人源内参基因的等温扩增引物、探针组合序列和反应缓冲液，该体系特异性好，灵敏度高（50cp/mL），特异性高，只需20min的检测时间，最快可在10min左右报阳性。CN112266986ACN112266986A权利要求书1/3页1.病毒核酸提取或保存试剂，其特征在于，包括组分1和组分2；所述组分1包括磁珠；所述磁珠含有oligodT14-20；所述组分2为裂解保存液；所述裂解保存液包括如下组分：十二烷基硫酸锂0.01%~0.05%（w/v）TritonX-1000.5%~3%（v/v）异硫氰酸胍0.5M~1.5MTris0.01M~0.1MNaCl0.1M~0.2M。2.如权利要求1所述的病毒核酸提取或保存试剂，其特征在于，还包括组分3，所述组分3包括清洗液，所述清洗液包括如下组分：TritonX-1000.05%~0.2%（v/v）KCl0.05M~0.2M。3.如权利要求2所述的病毒核酸提取或保存试剂，其特征在于，还包括组分4，所述组分4包括洗脱液，所述洗脱液包括如下组分：Tris10mM~100mMEDTA1mM~10mM。4.如权利要求1至3任一项所述的病毒核酸提取或保存试剂在制备病毒核酸检测试剂盒中的应用；所述病毒包括新型冠状病毒COVID-19。5.引物探针组合，其特征在于，包括如下组合中的一种或两者以上：引物组合一：根据COVID-19的N基因序列获得的RT-LAMP的引物组合（1）、N1-F3：具有如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列；和（2）、N1-B3：具有如SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；和（3）、N1-FIP：具有如SEQIDNo.3所示的核苷酸序列；和（4）、N1-BIP：具有如SEQIDNo.4所示的核苷酸序列；和（5）、N1-LF：具有如SEQIDNo.5所示的核苷酸序列；和（6）、N1-LB：具有如SEQIDNo.6所示的核苷酸序列；或（7）、如（1）~（6）任一项所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与（1）~（6）任一项所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；（8）、与（1）~（6）任一项所示的核苷酸序列至少有80%同一性的核苷酸序列；和/或探针组合一：COVID-19N基因荧光探针（9）、N-BHQ1：具有如SEQIDNo.7所示的核苷酸序列；和（10）、N-ROX：具有如SEQIDNo.8所示的核苷酸序列；或（11）、如（9）或（10）所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列，且与（9）或（10）所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；（12）、与（9）或（10）所示的核苷酸序列至少有80%同一性的核苷酸序列；2CN112266986A权利要求书2/3页和/或引物组合二：根据COVID-19的ORF基因序列获得的RT-LAMP的引物组合（13）、19cov-ORF-1-F3：具有如SEQIDNo.9所示的核苷酸序列；和（14）、19cov-ORF-1-B3：具有如SEQIDNo.10所示的核苷酸序列；和（15）、19cov-ORF-1-FIP：具有如SEQIDNo.11所示的核苷酸序列；和（16）、19cov-ORF-1-BIP：具有如SEQIDNo.12所示的核苷酸序列；和（17）、19cov-ORF-1-LF：具有如SEQIDNo.13所示的核苷酸序列；和（18