基于新型冠状病毒抗原的乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112485422A(43)申请公布日2021.03.12(21)申请号202011242428.9(22)申请日2020.11.09(71)申请人桂林电子科技大学地址541004广西壮族自治区桂林市七星区金鸡路1号(72)发明人陈真诚张启韩赵飞骏申琳肖皓霖操良丽(74)专利代理机构桂林市华杰专利商标事务所有限责任公司45112代理人杨雪梅(51)Int.Cl.G01N33/569(2006.01)G01N33/558(2006.01)G01N33/546(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书2页说明书5页附图1页(54)发明名称基于新型冠状病毒抗原的乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种基于新型冠状病毒抗原的乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法，试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；所述乳胶微球垫上包被有乳胶微球标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体作为检测线，以及包被有重组羊抗鼠新型冠状病毒抗体作为质控线。本发明乳胶微球免疫层析试纸条采用双抗体夹心免疫法检测新型冠状病毒，具有较好的敏感性、特异性、重复性和稳定性，对目标化合物的回收率较高，检验结果准确可靠；实现了新型冠状病毒的单人份快速定性检测，且灵敏度高，批内、批间差异小，为临床使用提供了极大便利。CN112485422ACN112485422A权利要求书1/2页1.基于新型冠状病毒抗原的乳胶微球免疫层析试纸条，包括PVC底板，其特征在于：所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；所述乳胶微球垫上包被有乳胶微球标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体；所述硝酸纤维素膜上包被有重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体作为检测线，以及包被有重组羊抗鼠新型冠状病毒抗体作为质控线。2.根据权利要求1所述的乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于：所述乳胶微球标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体的浓度为3‑18μg/mL，其在乳胶微球垫上的包被量为200uL；所述重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体的浓度为0.5‑3mg/ml，包被量为30uL；所述重组羊抗鼠新型冠状病毒抗体的浓度为0.5‑3mg/ml，包被量为30uL。3.根据权利要求1所述的乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于：所述乳胶微球垫上还包括分离剂，所述分离剂为酪蛋白、BSA或PEG6000中的任意一种或至少两种的组合。4.根据权利要求3所述的乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于：所述分离剂为浓度10％的PEG6000。5.根据权利要求1所述的乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于：所述乳胶微球垫上的乳胶微球颗粒的粒径为300‑400nm。6.根据权利要求1所述的乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于：所述检测线的距离为3‑5cm，检测线与质控线的距离为3‑5cm，检测线和质控线相互不受干扰。7.根据权利要求1所述的乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜；所述乳胶微球垫为玻璃纤维膜。8.根据权利要求1‑7任一项所述的乳胶微球免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备乳胶微球垫，在乳胶微球垫上包被乳胶微球标记的重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体；（2）制备硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜上重组鼠抗人新型冠状病毒第二抗体作为检测线，包被重组羊抗鼠新型冠状病毒抗体作为质控线；（3）在PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，即得。9.根据权利要求8所述的乳胶微球免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：所述乳胶微球垫的制备，包括以下步骤：（1）器皿洗干净，采用氢氧化钠缓冲液将乳胶微球颗粒的pH值调整至8.5，加入器皿中，再向其中加入终浓度10％的分离剂，再加入重组鼠抗人新型冠状病毒第一抗体至浓度30μg/mL，搅拌40min，得到乳胶微球溶液；（2）向步骤（1）得到的乳胶微球溶液中加入10％封闭液至终浓度到1％进行封闭15min；所述封闭液为酪蛋白和/或BSA溶液；（3）将步骤（2）得到的乳胶微球溶液使用4℃、12000rpm进行离心40min，离心后去上清，使用复溶液复溶沉淀，得到重组新冠病毒抗原标记液；所述复溶液为0.015%吐温20和0.015%BSA两种溶液的混合；（4）将步骤（3）得到的重组新冠病毒抗原标记液使用喷金划膜仪按0.1μL/mm进行喷涂2CN112485422A权利要求书2/2页到乳胶微球垫上；（5）将步骤（4）的乳胶微球垫在37℃烘箱中干燥240min，干燥后加干燥剂密封保存，即得到乳胶微球垫。10