用于检测猪圆环病毒2型的红色乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114487396A(43)申请公布日2022.05.13(21)申请号202111565323.1(51)Int.Cl.(22)申请日2021.12.20G01N33/569(2006.01)G01N33/558(2006.01)(83)生物保藏信息G01N33/577(2006.01)CGMCCNo.238702021.11.18G01N33/532(2006.01)CGMCCNo.238712021.11.18G01N33/58(2006.01)(71)申请人中国农业科学院哈尔滨兽医研究所C07K16/08(2006.01)(中国动物卫生与流行病学中心哈C12N5/20(2006.01)尔滨分中心)地址150009黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号(72)发明人冯力黄立平刘长明危艳武(74)专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司11139专利代理师马鑫权利要求书1页说明书14页附图3页(54)发明名称用于检测猪圆环病毒2型的红色乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了用于检测猪圆环病毒2型的红色乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用。所述的试纸条包括PVC底板，以及在PVC底板上从左到右依次组装的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的结合垫上涂覆有红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7，所述的硝酸纤维素膜上设有包被抗猪圆环病毒2型单克隆抗体9H4的检测线以及包被山羊抗鼠IgG的质控线。本发明中标记抗体和捕获抗体是挑选的最为广谱性的单抗，故对三种基因型的PCV2都具有较好的检测敏感性，与其他的病毒均无交叉反应。因此，本发明成功筛选出PCV2的广谱性单抗且成功建立了检测PCV2抗原的红色乳胶微球免疫层析试纸条，为后续的PCV2流行病学调查和净化提供了新的技术手段。CN114487396ACN114487396A权利要求书1/1页1.用于检测猪圆环病毒2型的红色乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括PVC底板，以及在PVC底板上从左到右依次组装的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述的结合垫上涂覆有红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型病毒单克隆抗体7C7，所述的硝酸纤维素膜设有包被抗猪圆环病毒2型病毒单克隆抗体9H4的检测线以及包被山羊抗鼠IgG的质控线；其中，所述的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7，命名为mAb7C7，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCCNo.23871，保藏日期为2021年11月18日；其中，所述的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体9H4，命名为mAb9H4，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为：CGMCCNo.23870，保藏日期为2021年11月18日。2.如权利要求1所述的红色乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于，红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7按照15ul/cm喷涂于玻璃纤维上作为结合垫，其中，单克隆抗体7C7和红色乳胶微球的标记比例为100μg：1mg；检测线上单克隆抗体9H4和质控线上山羊抗鼠IgG的浓度均0.5mg/ml。3.如权利要求1所述的红色乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于，检测线与质控线的距离为1cm。4.如权利要求1所述的红色乳胶微球免疫层析试纸条，其特征在于，红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7通过以下方法制备得到：取1mg红色乳胶微球溶液，80HZ超声5min，用超纯水稀释200倍，然后10000rpm离心10min，洗去上清，沉淀用pH＝5.6的1000μl0.1M的柠檬酸缓冲液溶解，80HZ超声5min；获得的溶液在磁力搅拌下缓慢加入100μl浓度为1mg/ml纯化后的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体7C7，室温缓慢搅拌2h后缓慢加入50g/LBSA使其终浓度为10g/L，继续搅拌1小时后10000rpm离心1h；沉淀用0.1MPBS溶解，80HZ超声5min，反复洗涤3次，最终沉淀用0.1MPBS溶解至原体积的1/20，得到红色乳胶微球偶联的抗猪圆环病毒2型病毒单克隆抗体7C7溶液。5.权利要求1‑4任一项所述的红色乳胶微球免疫层析试纸条在制备检测猪圆环病毒2型试剂中的应用。2CN114487396A说明书1/14页用于检测猪圆环病毒2型的红色乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及一种彩色乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用，特别涉及一种用于检测猪圆环病毒2型的红色乳胶微球免疫层析试纸条及其制备方法和应用。本发明属于病毒检测技术领域。背景技术[0002]猪圆环病毒2型病毒(porcinecircovirstype2，PCV2)属于圆