一种捕获单克隆抗体-肿瘤坏死因子融合蛋白的亲和纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112574321A(43)申请公布日2021.03.30(21)申请号202011611594.1(22)申请日2020.12.30(71)申请人上海赛金生物医药有限公司地址201203上海市浦东新区中国（上海）自由贸易试验区春晓路300号(72)发明人方国波蔡则玲吴珩(74)专利代理机构上海一平知识产权代理有限公司31266代理人王正君徐迅(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C07K1/22(2006.01)A61L2/18(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表4页附图1页(54)发明名称一种捕获单克隆抗体-肿瘤坏死因子融合蛋白的亲和纯化方法(57)摘要本发明公开了一种捕获抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白的亲和纯化方法，具体地，本发明公开了的方法包括如下步骤：(a)提供一待纯化的原料，其中所述原料含有抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白；(b)将所述待纯化的原料进行亲和层析，收集含有样品峰的洗脱液，所述亲和层析的填料选自下组：MabselecctSuRe、PrismA、MabcaptureA、AmsphereA3、EshmunoA、KancapA3G、Unimab50、或其组合，所述洗脱液为含有抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白的中间产品。用本发明方法纯化的抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白具有很高的纯度和收率，并且聚集体的含量极低，因此具有很高的安全性和广泛的应用前景。CN112574321ACN112574321A权利要求书1/1页1.一种对抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白进行纯化的方法，其特征在于，包括步骤：(a)提供一待纯化的原料，其中所述原料含有抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白；(b)将所述待纯化的原料进行亲和层析，收集含有样品峰的洗脱液，所述亲和层析的填料选自下组：MabselecctSuRe、PrismA、MabcaptureA、AmsphereA3、EshmunoA、KancapA3G、Unimab50、或其组合，所述洗脱液为含有抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白的中间产品。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白包括抗Her‑2人源化单克隆抗体‑肿瘤坏死因子a融合蛋白。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述填料选自下组：KancapA3G、Unimab50、或其组合。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)中还包括：(b1)用淋洗缓冲液对层析柱进行淋洗；和/或(b2)用平衡缓冲液对层析柱进行平衡；和(b3)用洗脱缓冲液洗脱，并收集含有样品峰的洗脱液，所述洗脱液为含有抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白的中间产品。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(b1)中，所述淋洗缓冲液选自下组：醋酸‑醋酸钠缓冲液、Tris‑盐酸缓冲液、枸橼酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、甘氨酸‑盐酸缓冲液、或其组合。6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(b2)中，所述平衡缓冲液选自下组：磷酸盐缓冲液、Tris‑盐酸缓冲液、或其组合。7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(b3)中，所述洗脱缓冲液选自下组：醋酸‑醋酸钠缓冲液、甘氨酸‑盐酸缓冲液、枸橼酸缓冲液、精氨酸‑盐酸缓冲液、或其组合。8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液的浓度为10－300mmol/L，较佳地，10－200mmol/L，更佳地，20－100mmol/L。9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(b3)中，所述洗脱液的pH为3.2－5，较佳地，3.8‑4。10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱液中，所述聚集体含量≤10％，较佳地，≤5％，更佳地，≤2％。2CN112574321A说明书1/9页一种捕获单克隆抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白的亲和纯化方法技术领域[0001]本发明涉及蛋白纯化领域，具体地，涉及一种捕获单克隆抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白的亲和纯化方法。背景技术[0002]单克隆抗体广泛应用于肿瘤的靶向治疗，通过结合肿瘤组织细胞表面抗原分子，抑制肿瘤细胞的生长。为增强单克隆抗体的治疗效果，对单克隆抗体进行改造，如改变糖基化修饰增加ADCC功能；单克隆抗体藕连化学分子，增加杀伤效果如ADC分子；开发双特异性抗体结合不同的抗原分子，增强药物功能的协调作用；开发抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白，协调免疫细胞作用，增强抑制肿瘤细胞生长功能或杀伤。抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白由于独特的分子机制，目前发展成为肿瘤治疗分子开发的热点。抗体‑肿瘤坏死因子融合蛋白药物开发过程中，除关注产品的安全性和有效性外，还应重点关注分子的稳定性，特别是由于肿瘤坏死因子引起的分子聚集。[0003]单克隆抗体制备过程中，首选ProteinA层析用于单克隆抗体