基于响应面法优化白背叶楤木茎皮多糖的超声辅助提取工艺.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112724276A(43)申请公布日2021.04.30(21)申请号202110138318.6(22)申请日2021.02.01(71)申请人昭通学院地址657000云南省昭通市昭阳区国学路申请人云南省林业调查规划院(72)发明人张新军吴富勤吴银梅杨顺强郎大田程立君陶文彩(74)专利代理机构昆明金科智诚知识产权代理事务所(普通合伙)53216代理人胡亚兰(51)Int.Cl.C08B37/00(2006.01)G01N21/31(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图6页(54)发明名称基于响应面法优化白背叶楤木茎皮多糖的超声辅助提取工艺(57)摘要本发明公开了基于响应面法优化白背叶楤木茎多糖的超声辅助提取工艺，包括将白背叶楤木茎皮置于干燥箱中杀青在粉碎机中粉碎，分别放于烧杯中并加入一定量的蒸馏水使达到不同料液比，在恒定超声波中，用不同温度、不同时间提取。提取过程加以机械搅拌，浓缩，加入无水乙醇，离心，取沉淀，加入丙酮和石油醚，回流脱脂，离心，把沉淀在干燥箱中烘干即为白背叶楤木茎粗多糖；粗多糖用sevage法除去蛋白，向多糖溶液中加入无水乙醇，在冰箱中醇沉过夜，将其离心取沉淀，烘干，即为白背叶楤木茎多糖。本发明的提取工艺准确可靠，稳定性、回收率、精密性良好，为白背叶楤木茎多糖的进一步开发研究提供了一定的理论依据。CN112724276ACN112724276A权利要求书1/2页1.一种白背叶楤木茎皮多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将白背叶楤木茎皮置于100‑110℃干燥箱中杀青20‑30min，之后将温度调整到75‑85℃，并在此温度下进行烘干，烘干后在粉碎机中将白背叶楤木茎皮粉碎成粉末状，备用；2)称取背叶楤木茎皮粉，放于烧杯中并加入蒸馏水浸泡，之后补入蒸馏水配置成一定料液比的白背叶楤木茎溶液；3)用恒定功率的超声波进行提取，提取过程加以机械搅拌，在一定提取时间和提取温度下提取，提取完成后过滤，将滤液水浴浓缩至10mL；4)浓缩液中加入其1.8‑2.5倍体积的浓度为95％的乙醇，在4℃冰箱中醇沉过夜，之后离心，取沉淀，按料液比1:20加入丙酮和石油醚(体积比为1：1)，充分搅拌后置于80‑90℃水浴锅中回流脱脂25‑35min，将其离心，取沉淀，将沉淀在60‑70℃干燥箱中烘干即为白背叶楤木茎皮粗多糖；5)粗多糖用sevage法除去蛋白：将粗多糖放入小烧杯中用蒸馏水充分溶解为粗多糖溶液，按体积比为4：1加入粗多糖溶液与sevage试剂，充分混合后离心，离心管的最上层即为除去蛋白的多糖溶液；6)向除去蛋白的多糖溶液中加入2倍体积的浓度为95％的乙醇，在4℃冰箱中醇沉过夜，将其离心取沉淀，65℃烘干，得到白背叶楤木茎皮多糖。2.根据权利要求1所述的白背叶楤木茎皮多糖的提取方法，其特征在于：步骤2)中的白背叶楤木茎皮粉与蒸馏水的料液比以g/ml计，为1:10、1:20、1:30、1:40、1:50或1:60中的任一个，此时固定步骤3)中的提取时间为40min，提取温度为60℃。3.根据权利要求1所述的白背叶楤木茎皮多糖的提取方法，其特征在于：步骤2)中的白背叶楤木茎皮粉与蒸馏水的料液比以g/ml计，固定料液比为1:50，固定步骤3)中的提取温度为60℃，此时步骤3)中的提取时间以min计，为30、40、50、60、70或80中的任一个。4.根据权利要求1所述的白背叶楤木茎皮多糖的提取方法，其特征在于：步骤2)中的白背叶楤木茎皮粉与蒸馏水的料液比以g/ml计，固定料液比为1:50，固定步骤3)中的提取时间为60min，此时步骤3)中的提取温度以为℃计，为30、40、50、60、70或80中的任一个。5.根据权利要求1所述的白背叶楤木茎皮多糖的提取方法，其特征在于：步骤2)中蒸馏水浸泡时间为0.8‑1.2h。6.根据权利要求1所述的白背叶楤木茎皮多糖的提取方法，其特征在于：步骤3)中恒定超声波的功率为600W。7.根据权利要求1所述的白背叶楤木茎皮多糖的提取方法，对白背叶楤木茎多糖进行含量测定，其特征在于，包括如下步骤：1)葡萄糖标准液配置：精密称取标准葡萄糖样品0.02g于小烧杯中，加蒸馏水溶解，定容至100ml的容量瓶中，充分摇匀，配成0.02mg/ml的葡萄糖标准溶液，放4℃冰箱保存；2)葡萄糖标准曲线的绘制：分别吸取标准葡萄糖溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4和1.6ml于9支20ml带塞试管中，用蒸馏水补至2.0ml，然后加入1.0ml6％的苯酚溶液和5.0ml的浓硫酸，充分摇匀，在80℃水浴中加热30min，然后置于冷水浴中冷却至室温，以加0mL葡萄糖溶液的试管内溶液做空白对照，在490nm处