一种测定蔬菜中硒形态含量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113189233A(43)申请公布日2021.07.30(21)申请号202110470129.9G01N30/32(2006.01)(22)申请日2021.04.28G01N30/34(2006.01)G01N30/74(2006.01)(71)申请人江西省农业科学院农产品质量安全G01N30/86(2006.01)与标准研究所G01N21/64(2006.01)地址330200江西省南昌市青云谱区南莲路602号(72)发明人魏益华张金艳戴廷灿邱素艳涂田华(74)专利代理机构北京三聚阳光知识产权代理有限公司11250代理人张琳琳(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/14(2006.01)G01N30/30(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图1页(54)发明名称一种测定蔬菜中硒形态含量的方法(57)摘要本发明公开一种测定蔬菜中硒形态含量的方法，所述方法使用离子对反相高效液相色谱‑紫外‑氢化物发生‑原子荧光光谱法测试待测样品中的硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒脲、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸、亚硒酸根和硒酸根7种硒形态和含量。本发明的测定方法无机硒提取加入碘乙酰胺，解决了HPLC‑HG‑AFS中分析测试亚硒酸根回收率差的问题；前处理操作快速、简便，蛋白酶所需种类少且用量少，试剂成本低，样品提取率高，大大提高了硒形态HPLC‑HG‑AFS分析方法的灵敏度和分离度；一次可同时分析测定7种硒形态含量，且仪器分析测试时间短。CN113189233ACN113189233A权利要求书1/1页1.一种测定蔬菜中硒形态含量的方法，其特征在于，所述方法使用离子对反相高效液相色谱‑紫外‑氢化物发生‑原子荧光光谱法测试待测样品中的硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒脲、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸、亚硒酸根和硒酸根7种硒形态和含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：取1份待测样品加入碘乙酰胺溶液，使用超声波提取后过滤上机测试，测定亚硒酸根的形态和含量；S2：取另外1份待测样品，加入水后超声破壁，再加入蛋白酶使用超声波提取后过滤上机测试，测定除亚硒酸根以外硒的形态和含量。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1和S2中所述上机测试的仪器分析测试条件为：液相色谱条件：C18反相色谱柱(250×4.6mm，5μm)，流动相为30mmol/L磷酸氢二铵溶液，其中含有0.5mmol/L四丁基溴化铵，同时含有2％甲醇，pH为6.0，流速为1.2mL/min，进样量为100μL，柱温为35℃；紫外条件：紫外灯功率40w，长度28cm，在线紫外消解；氢化物发生条件：0.35％氢氧化钾+0.05％碘化钾，0.35％氢氧化钾+1.5％硼氢化钾，10％盐酸，泵转速60r/min；原子荧光光谱条件：负高压300V，灯总电流80mA，载气流量300mL/min，屏蔽气流量500mL/min，原子化器高度9mm。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S1和步骤S2中，所述过滤包括将经超声波提取后的溶液使用滤纸过滤定容，滤液再经超滤离心管离心净化，最后过膜取溶液液体。5.根据权利要求4所述的方法，所述定容体积为10‑25mL；所述膜为尼龙滤膜，孔径为0.45μm。6.根据权利要求2‑5任一项所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述蛋白酶为蛋白酶K，其与所述1份待测样品质量比为1：30‑1：40；所述超声破壁的功率为60‑90w，时间为60‑90s。7.根据权利要求2‑6任一项所述的方法，其特征在于，步骤S1中碘乙酰胺的浓度为1‑5mmol/L。8.根据权利要求2‑7任一项所述的方法，其特征在于，步骤S1和S2中所述超声提取的频率为20kHz频率超声，温度为50‑60℃，时间为30min，重复2次。9.根据权利要求2‑8任一项所述的方法，其特征在于，步骤S1和S2中，所述待测样品为表面用纯水冲洗干净/擦干、经过匀浆机匀浆1‑2min后的蔬菜，所述待测样品每一份的质量为0.5‑5g。2CN113189233A说明书1/6页一种测定蔬菜中硒形态含量的方法技术领域[0001]本发明属于质量检测技术领域，具体涉及一种测定蔬菜中硒形态含量的方法。背景技术[0002]硒作为一种人体必需的营养元素，人体内各种活性酶的重要组成成分，被世界卫生组织和中华医学会定为二十一世纪继碘、锌后必补的第三大微量营养保健元素。硒在预防克山病、增强免疫力、抗氧化、防癌抗癌、护肝、保心、促进脑力发育、防治糖尿病、调节内分泌与维生素吸收与利用、保护甲状腺和前列腺等方面均发挥着重要作用。[0003]硒在生物体内的生物利用度、有效性、毒性以及代谢等不仅与硒的总量有关，