一种枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113234646A(43)申请公布日2021.08.10(21)申请号202110782116.5(22)申请日2021.07.12(71)申请人北京新正和农业科技有限公司地址100023北京市朝阳区黄厂路3号院6号楼11层1122(72)发明人易虹(74)专利代理机构北京国谦专利代理事务所(普通合伙)11752代理人肖应国(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)A01N63/22(2020.01)A01P1/00(2006.01)A01P3/00(2006.01)C12R1/125(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用，该菌剂由枯草芽孢杆菌菌种活化、液体发酵培养、陶瓷膜过滤、喷雾干燥后获得，可用于防治各种农作物的真菌和细菌病菌侵染，该制备方法简单，具有发酵周期短、放罐活孢子数高、陶瓷膜过滤收率高和防治效果好、稳定性强的优点。CN113234646ACN113234646A权利要求书1/1页1.一种枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：（1）枯草芽孢杆菌菌种活化，得种子液；（2）种子液加入液体发酵培养基中进行液体发酵培养，得发酵液；（3）发酵液用陶瓷膜过滤，得浓缩液；（4）浓缩液经喷雾干燥，得菌剂原粉；所述步骤（1）中的菌种活化包括在固体培养基上进行二次传代培养，确定生产用菌株，在固体培养基上扩繁；所述步骤（2）中的液体发酵培养包括以30%的接种量将种子液接种于液体发酵培养基中，在pH值6.8‑8.5条件下培养30小时；当pH值异常升高时，在确定未染菌的情况下，补充适量10%葡萄糖，同时降低空气流量，至到pH值恢复正常。2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述液体发酵培养基配方如下：淀粉2.46%；葡萄糖0.89%；冷榨黄豆饼粉2.15%；热榨花生饼粉2.15%；蛋白胨0.11%；鱼粉0.15%；硝酸钾0.11%；酵母粉0.16%；碳酸钙0.16%；硫酸铵0.16%；消泡剂0.05%，余量为水，其中百分比为质量比。3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的陶瓷膜过滤包括将发酵液调节pH值至4.5后，采用陶瓷膜过滤，入膜压力≥0.35Mpa，出膜压力≤0.2Mpa，透析流量2.5M3/H，温度30℃，得浓缩液。4.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中的喷雾干燥包括将浓缩液中加入5%淀粉和5%碳酸钙，于喷雾塔中喷雾干燥，喷雾塔进风温度145~160℃，出风温度70~80℃。5.一种枯草芽孢杆菌菌剂，其特征在于，所述菌剂由权利要求1‑4任一项所述的制备方法制备而成。6.一种权利要求5所述的菌剂在防治农作物真菌病害和细菌病害中的应用，其特征在于，所述真菌病害包括由镰刀菌属真菌引起的病害、由轮枝菌属真菌引起的病害、由交链孢菌属真菌引起的病害、由壳二孢属真菌引起的病害、白粉病、黑胫病、根腐病、灰腐白腐病、黑星病、疫霉病；和/或所述细菌病害包括由欧氏杆菌属细菌引起的软腐病、黄单胞菌属引起的白叶枯病、假单胞杆菌属引起的野火病、青枯雷尔氏杆菌属引起的青枯病。2CN113234646A说明书1/5页一种枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用技术领域[0001]本申请涉及微生物生物学技术领域，具体而言，涉及一种枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用。背景技术[0002]真菌、细菌性病害是危害农作物生长的两类大病害，一直严重危害着农业生产；目前，常用的防治真、细菌性病害的药剂主要是化学农药。化学药剂通常存在对有些病害防治效果一般，对生态环境及农产品质量安全影响很大。[0003]现有枯草芽孢杆菌制剂多为单一作用功能，要么只能防治真菌性病害，要么只能防治细菌性病害，且现有菌剂活性衰减率≥60%，遗传变异率≥70%，抗环境干扰性弱工业化产出1500左右（亿芽孢/克），防治率≤60%。虽然现有技术中也有一些声称能够同时防治真菌和细菌病害的枯草芽孢杆菌菌剂，但是这些菌剂的制备均为高温及长周期发酵，菌株防效范围窄、防治率不高，且高温与长周期发酵工艺耗能不经济。例如CN102146352A（一种枯草芽孢杆菌及其应用）发酵周期过长，48~72小时，且耗能大；该菌剂也仅仅在杨木变色病中的应用。CN103146617A（一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用）采取高温35~38℃培养，长周期发酵48~72小时的耗能较大；仅对黄瓜、西瓜黄萎病（真菌性病害）有防治作用。CN104232514A（一种枯草芽孢杆菌及其应用）和CN1042636