一种多粘芽孢杆菌菌剂及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111454860A(43)申请公布日2020.07.28(21)申请号202010275264.3C12R1/12(2006.01)(22)申请日2020.04.09(83)生物保藏信息CCTCCNO:M20191162019.02.28(71)申请人广西乐土生物科技有限公司地址530000广西壮族自治区南宁市科园大道31号财智时代12层B1215(72)发明人吕昆明廖华廖博杨瑞青王健陈裕新黄一帆(74)专利代理机构北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙)11465代理人赵徐平(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书9页C12N1/20(2006.01)序列表1页(54)发明名称一种多粘芽孢杆菌菌剂及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种多粘芽孢杆菌菌剂，其有效成分包括：多粘芽孢杆菌；所述多粘芽孢杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNo：M2019116，16srRNA序列如SEQIDNo.1所示；制备过程为：配置培养基、菌种活化、种子培养、发酵培养、制备菌剂；该菌剂可以有效地防治柑橘溃疡病，降低该病的发病率。CN111454860ACN111454860A权利要求书1/1页1.一种多粘芽孢杆菌菌剂，其特征在于，其有效成分包括：多粘芽孢杆菌；所述多粘芽孢杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNo：M2019116，命名为LTPP03，16srRNA序列如SEQIDNo.1所示。2.根据权利要求1所述的一种多粘芽孢杆菌菌剂，其特征在于，所述菌剂中活菌数为5.0～5.2×109cfu/g。3.一种多粘芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，制备过程如下：1)配置培养基：配置保藏培养基、种子培养基和发酵培养基，灭菌，备用；2)菌种活化：将LTPP03菌株接种至种子斜面培养基中进行活化，得到活化菌种；3)种子培养：挑取步骤2)所得活化菌种接种至100-120ml种子培养基中，培养，得到种子菌液；4)发酵培养：将发酵培养基倾倒至发酵罐中，灭菌、冷却，并向发酵罐中加入发酵培养基4％接种量的种子菌液，发酵培养，得到发酵液；5)制备菌剂：用15％葡萄糖吸附发酵液，经喷雾干燥后，制备成可湿性粉剂菌剂。4.根据权利要求3所述的一种多粘芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述保藏培养基由下述成分组成：可溶性淀粉20g、KNO30.5g、NaCl0.5g、K2HPO4·3H2O1.0g、FeSO4·7H2O0.01g、MgSO4·7H2O0.5g、琼脂粉20g和水1L。5.根据权利要求3所述的一种多粘芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述种子培养基由下述成分组成：蔗糖30g、蛋白胨5g、FeSO4·7H2O0.01g,、MgSO4·7H2O0.5g、KCl0.5g、K2HPO41g和水1L；所述种子斜面培养基由下述成分组成：蔗糖30g、蛋白胨5g、FeSO4·7H2O0.01g、MgSO4·7H2O0.5g、KCl0.5g、K2HPO41g、琼脂粉20g和水1L。6.根据权利要求3所述的一种多粘芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基由下述成分组成：糖蜜液5g、胰蛋白胨17g、大豆蛋白胨3g、NaCl5g、K2HPO42.5g和水1L，pH为7.2±0.2。7.根据权利要求3所述的一种多粘芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，步骤2)中，菌种活化的条件为：30-37℃培养20-24h。8.根据权利要求3所述的一种多粘芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，步骤3)中，种子培养的条件为：30-37℃、110～120r/min震荡培养40-50h。9.根据权利要求3所述的一种多粘芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，步骤4)中，发酵培养的条件为：发酵罐转速110-130r/min、通气量为1:1～1:2、温度为30-37℃、培养70-80h。10.根据权利要求3-9任一所述的一种多粘芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，步骤4)中，对种子菌液进行发酵培养20h后，向发酵罐中添加质量分数为0.05％的有机硅消泡剂，继续发酵。2CN111454860A说明书1/9页一种多粘芽孢杆菌菌剂及其制备方法技术领域[0001]本发明涉及微生物菌剂技术领域，更具体地说是涉及一种多粘芽孢杆菌菌剂及其制备方法。背景技术[0002]柑橘溃疡病是由黄极毛杆菌所致的疾病，多发病于柑橘；该病危害柑橘叶片、枝梢和果实，苗木和幼树受害严重时造成落叶、枯梢，影响树势；果实受害重者落果，轻者带有病疤不耐贮藏，发生腐烂，大大降低果实商品价值，使果农增加病虫防治成本，经济效益受损。[0003]现阶段，通常以对柑橘叶片喷洒农药的方式防治柑橘溃疡病，但是农药一方面容易使病原菌产生