用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113372437A(43)申请公布日2021.09.10(21)申请号202110862417.9(22)申请日2021.07.29(71)申请人苏州博进生物技术有限公司地址215129江苏省苏州市高新区旺米街66号4幢2楼(72)发明人瞿欢欢王佳琛(74)专利代理机构北京北汇律师事务所11711代理人高元吉(51)Int.Cl.C07K14/79(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页(54)发明名称用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法(57)摘要本发明公开一种用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其包括(a)使新鲜的脱脂牛奶直接通过装填有阳离子交换填料的层析柱，所述阳离子交换填料具有一定的粒径和孔径；(b)用水和含第一浓度盐的水溶液清洗残留的牛奶和杂质；(c)用含第二浓度盐的水溶液或缓冲液以200‑1000cm/h的流速洗脱，得到乳铁蛋白。本发明建立了一种适用于工业级从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，提取乳铁蛋白的纯度和收率大大提高。此外，本发明的方法避免了使用大型复杂设备，同时通过简单的提取和纯化，实现低成本乳铁蛋白的提取。CN113372437ACN113372437A权利要求书1/1页1.一种用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)使新鲜的脱脂牛奶直接通过装填有阳离子交换填料的层析柱，所述阳离子交换填料的平均粒径为60‑500μm且孔径为100‑500nm；(b)用水和含第一浓度盐的水溶液清洗残留的牛奶和杂质；(c)用含第二浓度盐的水溶液或缓冲液以200‑1000cm/h的流速洗脱，得到乳铁蛋白。2.根据权利要求1所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，进一步包括(d)用0.5‑1M的NaOH溶液清洗再生装填有阳离子交换填料的层析柱。3.根据权利要求1所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，从牛奶中提取乳铁蛋白的纯度不低于92％，乳铁蛋白的收率不低于60％。4.根据权利要求1所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述阳离子交换填料的装填高度为100‑500mm。5.根据权利要求1所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述阳离子交换填料为多孔聚甲基丙烯酸酯球形颗粒，且表面带有磺酸根基团。6.根据权利要求5所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述阳离子交换填料的交联度为50％‑80％。7.根据权利要求1所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述含盐的水溶液是氯化钠或硫酸钠溶液。8.根据权利要求1所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述第二浓度大于所述第一浓度。9.根据权利要求1所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述缓冲液是pH5.0‑7.0的磷酸盐缓冲液或乙酸钠缓冲液。10.根据权利要求1‑9任一项所述的用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述牛奶为脱脂牛奶。2CN113372437A说明书1/5页用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法技术领域[0001]本发明涉及蛋白提取和纯化领域，具体地涉及提取乳铁蛋白的方法，尤其是涉及用于从牛奶中提取乳铁蛋白的方法。背景技术[0002]乳铁蛋白(lactoferrin，LF)是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，人乳中乳铁蛋白浓度约为1.0‑3.2mg/ml，为婴幼儿提供多种生物功能，尤其是调节免疫和对病原微生物的抵御功能。对于非母乳喂养的婴幼儿，动物奶中的乳铁蛋白含量只有0.02‑0.35mg/ml，远远低于人乳中乳铁蛋白的含量，无法满足婴幼儿的喂养要求。[0003]基于众多的研究成果和试验，在婴幼儿配方食品中添加乳铁蛋白具有重要意义，既可满足婴儿生长发育的需要，同时又对婴儿的健康起到保护作用。根据最新的国家标准GB14880将乳铁蛋白列为营养强化剂。因此，乳铁蛋白的提取和纯化显得尤为重要。[0004]例如，CN210841449U公开了新型的天然牛奶乳铁蛋白提取设备，包括固定盖、反应釜、控制箱、水泵和分离器，固定架内部的底部安装有控制箱，固定架内部的一侧安装有反应釜，固定盖的一侧设置有安全管，反应釜的底部安装有水泵，反应釜的一侧安装有分离器，分离器的内部设置有加热丝，分离器之间安装有挡板，挡板的底部安装有气体管道，螺旋挡板的下方设置有过滤网，分离器的底部安装有排出口，排出口的底部安装有连接头，分离器的顶部安装有维修顶盖。该实用新型通过在底部的过滤网采用生物过滤膜可有效的对牛奶当中的乳铁蛋白进行过滤，从而对乳铁蛋白进行收集，对于大规模的乳铁蛋白提取，设备要求相对较高且复杂。[0005]再例如，CN106008703A公开了一种从牛乳中提取与制备高纯度低