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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113502305A(43)申请公布日2021.10.15(21)申请号202110807361.7(22)申请日2021.07.16(71)申请人台州学院地址318000浙江省台州市椒江区市府大道1139号申请人台州达辰药业有限公司(72)发明人杨仲毅姜礼进蔡青峰汪怡璐方嘉怡覃文平(74)专利代理机构台州市方信知识产权代理有限公司33263代理人孙圣贵(51)Int.Cl.C12P13/02(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表2页附图3页(54)发明名称一种利用重组酰亚胺酶合成(R)-异丁基戊二酸单酰胺的方法(57)摘要本发明涉及一种利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,属于药物中间体合成技术领域。为了解决现在的反应不佳的问题,提供一种利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,该方法包括使底物异丁基戊二酰亚胺在重组酰亚胺酶的催化作用下,转化反应生成产物(R)‑异丁基戊二酸单酰胺;重组酰亚胺酶的基因序列如SEQIDNO.1所示,重组酰亚胺酶的序列如SEQIDNO.2所示。本发明通过采用酶法催化,实现具有高活性和反应位点的高选择性,能够优先催化环状亚胺结构的基团水解形成二羧基单酰胺的结构,且形成的产物具有高手性R型选择性和去对称化反应,从而也能够达到高手性产物收率的效果。CN113502305ACN113502305A权利要求书1/1页1.一种利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:使底物式Ⅰ化合物异丁基戊二酰亚胺在重组酰亚胺酶的催化作用下,转化反应生成产物式Ⅱ化合物(R)‑异丁基戊二酸单酰胺;所述重组酰亚胺酶的基因序列如SEQIDNO.1所示;所述重组酰亚胺酶的序列如SEQIDNO.2所示。2.根据权利要求1所述利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,其特征在于,所述转化反应在水中进行。3.根据权利要求1或2所述利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,其特征在于,所述转化反应的体系pH值控制在6.0‑9.0。4.根据权利要求3所述利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,其特征在于,所述转化反应的温度为20℃‑50℃。5.根据权利要求1或2所述利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,其特征在于,所述重组酰亚胺酶的宿主菌为BL21(DE3)。6.根据权利要求1或2所述利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,其特征在于,所述重组酰亚胺酶选自含有重组酰亚胺酶的菌体或酶液。2CN113502305A说明书1/7页一种利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法技术领域[0001]本发明涉及一种利用重组酰亚胺酶合成(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的方法,属于药物中间体合成技术领域。背景技术[0002](S)‑普瑞巴林((S)‑3‑氨甲基‑5‑甲基己酸)是由辉瑞开发的一种亲脂性氨基丁酸类似物,具有良好的抗焦虑和治疗神经痛的效果。普瑞巴林早期合成方法以化学拆分为主,生产成本相对较高。近十年来以酶法代替化学法进行拆分的研究较多。与化学法拆分相比,酶法拆分具有合成路线短,生产成本低,三废较少等优势。相关的拆分用酶主要为脂肪酶和腈水解酶等。拆分法一次理论收率只有50%,近年来出现的基于酶催化的去对称法,在理论上具有100%的一次收率,受到生产企业的密切关注。[0003]现有的有以非对称水解异丁基戊二酸二酰胺,得到的产物R‑异丁基戊二酸单酰胺ee值也较高。相比于异丁基戊二酸二酰胺,异丁基戊二酰亚胺更易于合成,更适于作为酶法工艺的起始化合物。[0004]专利文献CN112368262A中以异丁基戊二酰亚胺为原料,酶法去对称化水解得到(R)‑异丁基戊二酸单酰胺,其主要是采用的生物酶是脂肪酶或酯酶。但是根据普遍规律,脂肪酶和酯酶难以催化酰亚胺类化合物的开环反应,相关技术应用至今也没有相关学术文章给予报道或重复。原料异丁基戊二酰亚胺在水溶液中溶解度较低,该专利采用1:1‑1:2的水:有机溶剂比例来提高原料的溶解度,而这么高浓度的乙醇、丙酮等有机溶剂中,酶的活性是很难保存。[0005]2015年有学者报道了利用酰亚胺酶催化水解异丁基戊二酰亚胺得到(R)‑异丁基戊二酸单酰胺(AppliedMicrobiologyandBiotechnology,2015,99(23):9961‑9969),但反应的效率非常低,产物浓度只有约3.5g/L,反应转化率也只有64.6%,并且反应液并未提取得到目标产品。该反应浓度和转化率低下,产物导致利用酶法去对称化催化异丁基戊二酰亚胺制备(R)‑异丁基戊二酸单酰胺的路线优势彻底丧失。发明内容[0006