一种重组人血清白蛋白纯化过程去除色素的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113735963A(43)申请公布日2021.12.03(21)申请号202111059715.0(22)申请日2021.09.10(71)申请人山东健通生物科技有限公司地址271000山东省泰安市高新区龙泉路3602号(72)发明人齐智常贝贝艾云鹏高磊柏凯(74)专利代理机构北京中和立达知识产权代理事务所(普通合伙)11756代理人祝妍(51)Int.Cl.C07K14/765(2006.01)C07K1/18(2006.01)C07K1/14(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种重组人血清白蛋白纯化过程去除色素的方法(57)摘要本发明提供了一种重组人血清蛋白纯化过程去除色素的方法，所述采用脱色树脂结合硼酸填料作为脱色剂，可快速有效的脱除重组人血白蛋白生产中产生的杂质色素，并且不影响蛋白收率和活性，具有广阔的应用前景。CN113735963ACN113735963A权利要求书1/1页1.一种用于重组人血清白蛋白纯化过程去除色素的填料组合物，所述填料组合物包括阴离子脱色树脂和硼酸填料，所述阴离子脱色树脂和硼酸填料的组合比例为1‑8:1。2.一种重组人血清白蛋白纯化过程去除色素的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将含有HSA基因的重组酵母菌株经活化培养得到的种子液进行发酵培养；(2)发酵结束后，取含有rHSA的发酵液，通过离心去除酵母细胞，得到rHSA浓缩发酵上清液；(3)将步骤(2)获得的rHSA浓缩发酵上清液过脱色柱，所述脱色柱内的填料为如权利要求1所述的填料组合物。3.如权利要求2所述的方法，其中，所述填料组合物与rHSA浓缩发酵上清液的体积比为1:10‑1:20。4.如权利要求3所述的方法，其中，所述填料组合物中阴离子脱色树脂和硼酸填料的组合比例为4:1。5.如权利要求3所述的方法，其中,所述填料组合物与rHSA浓缩发酵上清液的体积比为1:20。6.如权利要求3所述的方法，其中，所述步骤(2)包括如下步骤：取含有rHSA的发酵液，通过叠片离心机去除酵母细胞，转速：12000rpm，料液温度：15℃，固含量：20‑30％，离心上清液过微滤，泵频25‑35HZ；入口压力不超过0.2MPa，透过液过30KD浓缩，浓缩液中按体积比为40％的比例加入无水乙醇，加入辛酸钠至终浓度为15mM，68℃加热30min，得到30KD浓缩液。7.如权利要求3所述的方法，其中，所述步骤(3)包括如下步骤：阴离子脱色树脂用纯化水浸泡24小时，充分涨溶；硼酸填料以NaCl浓度从低到高的梯度进行洗脱，NaCl浓度梯度设置在0.1M‑1M之间，洗脱后以20mMPB、PH7.0磷酸钠缓冲液平衡；将阴离子脱色树脂+硼酸填料，按4:1比例充分混匀，装入填料柱中，将获得的浓缩发酵上清液过脱色柱，阴离子脱色树脂+硼酸填料的组合物与上样液的体积比为1:20。2CN113735963A说明书1/5页一种重组人血清白蛋白纯化过程去除色素的方法技术领域[0001]本发明属于生物工程技术领域，更为具体的，本发明涉及一种快速有效的在基因重组白蛋白纯化过程去除色素的方法。背景技术[0002]人血清白蛋白(HSA)是人血浆中最丰富的蛋白质，占血浆总蛋白的50％～60％，浓度达38～48g/L，是人体血浆中最主要的蛋白质，维持机体营养与渗透压，在机体中具有重要的生理功能。肝脏每天约合成12g的白蛋白。HSA属于一种单链无糖基化蛋白质，组成为585个氨基酸，分子量是66.5kD，等电点介于4.7～4.9。人血清白蛋白被称为血液里的“黄金救命药”，临床上主要被用于以下适应症：(1)失血创伤、烧伤引起的休克；(2)晚期癌症患者的维持治疗；(3)脑水肿及损伤引起的颅压升高；(4)癌症、肝硬化及肾病引起的水肿或腹水；(5)低蛋白血症的防治；(6)新生儿高胆红素血症；(7)心肺分流术、烧伤或血液透析的辅助治疗、成人呼吸窘迫综合征，是临床急救的一种特殊药品。[0003]在生物医药领域，人血清白蛋白不仅可以作为药物直接经静脉注射使用，而且还可以作为优良的药物载体，延长药物的体内半衰期，实现药物长效，也可以作为疫苗等生物制剂的稳定剂使用，或作为CHO等细胞的培养基使用。但由于人血清白蛋白来源于血液制品，而在我国血液资源相对紧缺，所以人血清白蛋白的价格也比较昂贵。而运用基因技术人工培育人血白蛋白替代传统人血提取办法有效拓宽了人血白蛋白的获取来源。[0004]美国哈佛大学E.J.Cohn教授与其工作小组发明出一种被称为低温乙醇法的工艺，第一次从人血中提纯了人血清白蛋白。目前基因重组人血清白蛋白(rHSA)主要是用甲醇酵母生产的，在其生产过程中产生的杂质有两种：一种是与白蛋白没有直