基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114113055A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202111294864.5(22)申请日2021.11.03(71)申请人湖南农业大学地址410128湖南省长沙市芙蓉区农大路1号(72)发明人刘霞熊蓥姿罗玲丽(74)专利代理机构北京润平知识产权代理有限公司11283代理人周春雨(51)Int.Cl.G01N21/78(2006.01)G01N21/31(2006.01)G01N1/40(2006.01)权利要求书2页说明书11页附图3页(54)发明名称基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法(57)摘要本发明涉及分子检测技术领域，公开了一种基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法。该方法包括以下步骤：(1)将磁性分子印迹纳米酶与待测样品混合后，经震荡吸附得到诺氟沙星吸附溶液；(2)将所述诺氟沙星吸附溶液与缓冲液、过氧化物、显色底物混合后经反应I得到反应液I，测定所述反应液I的吸光度值，从而测得所述待测样品中的诺氟沙星含量。该方法将对诺氟沙星具有特异性吸附的磁性分子印迹纳米酶与比色化学传感技术相结合，检测灵敏度和准确性高，且检测快速、操作简单、选择性高、重现性和再生性好，回收率符合要求，具有重要的实际应用价值。CN114113055ACN114113055A权利要求书1/2页1.一种基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将磁性分子印迹纳米酶与待测样品混合后，经震荡吸附得到诺氟沙星吸附溶液；(2)将所述诺氟沙星吸附溶液与缓冲液、过氧化物、显色底物混合后经反应I得到反应液I，测定所述反应液I的吸光度值，从而测得所述待测样品中的诺氟沙星含量。2.根据权利要求1所述的基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，步骤(1)中所述震荡吸附的条件至少满足：转速为80‑120rpm、时间为10‑15min。3.根据权利要求1所述的基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，步骤(2)中所述缓冲液为乙酸‑乙酸盐缓冲液，所述过氧化物为过氧化氢，所述显色底物为3，3'，5，5'‑四甲基联苯胺；所述反应I的条件至少满足：温度为20‑30℃、反应时间为3‑6min。4.根据权利要求1至3中任意一项所述的基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，相对于1g的所述磁性分子印迹纳米酶，所述待测样品的用量为100‑150mL、所述缓冲液的用量为500‑850mL、所述过氧化物的用量为10‑20mmol、所述显色底物的用量为0.2‑1mmol。5.根据权利要求1至3中任意一项所述的基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，所述磁性分子印迹纳米酶的制备方法包括如下步骤：S1、将含有可溶性三价铁盐的水溶液除氧后，与可溶性二价铁盐、碱溶液混合进行反应II得到反应液II，将所述反应液II经磁分离I收集得到四氧化三铁纳米粒子；S2、将所述四氧化三铁纳米粒子经四甲基氢氧化铵活化后，与3‑氨丙基三乙氧基硅烷混合进行反应III，得到表面氨基化四氧化三铁纳米粒子；S3、将所述表面氨基化四氧化三铁纳米粒子、诺氟沙星与多巴胺混合进行反应IV后，经磁分离II收集得到所述磁性分子印迹纳米酶。6.根据权利要求5所述的基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，步骤S1中所述可溶性三价铁盐、所述可溶性二价铁盐与所述碱溶液中的碱的摩尔比为1:0.35‑0.8:3.5‑5.5；所述可溶性三价铁盐选自氯化铁、硫酸铁和硝酸铁中的至少一种，所述可溶性二价铁盐选自氯化亚铁、硫酸亚铁和硝酸亚铁中的至少一种，所述碱溶液选自氢氧化钠‑水溶液、氢氧化钾‑水溶液和氨水中的至少一种。7.根据权利要求5所述的基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，步骤S1中所述反应II的条件至少满足：以通入氮气的方法进行除氧，温度为75‑85℃、搅拌速率为500‑600rpm、反应时间为0.5‑1.5h；优选地，步骤S1还包括：将所述磁分离I得到的固体A利用水洗涤至pH为6‑7，再经真空干燥得到所述四氧化三铁纳米粒子。8.根据权利要求5所述的基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，步骤S2中，相对于1g的所述四氧化三铁纳米粒子，所述3‑氨丙基三乙氧基硅烷的用量为2‑5mL；所述反应III的反应溶剂为乙醇‑水溶液；优选地，所述反应III的条件至少满足：以通入氮气的方法进行除氧并进行暗反应，温2CN114113055A权利要求书2/2页度为30‑50℃、搅拌速率为300‑400rpm、反应时间为7‑12h。9.根据权利要求5所述的基于比色化学传感技术检测诺氟沙星的方法，其特征在于，步骤S3中，相对于1重量份的所述诺氟沙星，所述表面氨基