基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法及检测传感器.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115753650A(43)申请公布日2023.03.07(21)申请号202211283610.8G01N21/78(2006.01)(22)申请日2022.10.20(66)本国优先权数据202210967029.12022.08.12CN(71)申请人湖南农业大学地址410128湖南省长沙市芙蓉区农大路1号(72)发明人刘石刚吴天康石星波赵倩高文丽(74)专利代理机构长沙和雅知识产权代理事务所(普通合伙)43238专利代理师林传贵(51)Int.Cl.G01N21/31(2006.01)G01N21/64(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法及检测传感器(57)摘要本发明提供了一种基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法及检测传感器，以标记过氧化物酶的双酚A抗体为识别元件，以3,3',5,5'‑四甲基联苯胺溶液为比色信号源，以荧光硅量子点溶液为荧光信号源，以过氧化氢溶液为酶催化反应底物。将待检测试样与标记有过氧化物酶的双酚A抗体在有标记的微孔板中混合反应，然后洗涤并加入TMB和过氧化氢溶液反应，最后加入酸和硅量子点溶液测试吸收光谱和荧光发射光谱，得到双酚A浓度。本发明利用酶催化反应，催化TMB显色，TMB显色的同时通过荧光内滤效应和能量转移猝灭硅量子点的荧光，从而输出比色和荧光二元信号，实现双酚A的双信号定量检测。CN115753650ACN115753650A权利要求书1/1页1.一种基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.将待检测试样与标记有过氧化物酶的双酚A抗体加入标记有双酚A的微孔板中混合反应，然后甩掉反应液并洗涤微孔板；S2.向所述微孔板中加入3,3',5,5'‑四甲基联苯胺溶液和过氧化氢溶液，反应预设时间后，加入酸溶液和硅量子点溶液，得到测试液；S3.采用分光光度计测定所述测试液在400‑600nm范围的吸收光谱；设定荧光激发光为400nm，采用荧光光度计测定所述测试液在420‑600nm范围的荧光发射光谱，根据所述吸收光谱和荧光发射光谱的强度得到所述待检测试样中双酚A的浓度。2.根据权利要求1所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：根据步骤S1至S3，测试不同浓度双酚A标准溶液的吸收光谱和荧光发射光谱，得到双酚A双信号检测的工作曲线及相应的拟合函数，通过将所述测试液的吸收光谱和荧光发射光谱代入所述工作曲线或拟合函数，即得到所述待检测试样中双酚A的浓度。3.根据权利要求2所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，所述双酚A标准溶液的制备方法包括：称取预设质量的双酚A标准品溶于甲醇与水1：1的混合溶液中，然后稀释得到一系列浓度的双酚A标准溶液。4.根据权利要求2所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，所述荧光强度和双酚A浓度之间的函数关系为y＝11453‑4379/(1+4.1545x0.907)；吸光度差值和双酚A浓度之间的函数关系为y＝0.3561‑0.3561/(1+91.6x2.1507)。5.根据权利要求1所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述混合反应的温度为37℃，时间为20‑40min，反应完成后，甩去微孔中液体，并洗涤三遍，去除残余液体。6.根据权利要求5所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，所述微孔板使用前进行洗涤和封闭，具体包括：将一定量标记的双酚A加入聚苯乙烯微孔板中，在4℃下过夜；隔天甩去聚苯乙烯微孔板内的液体，用10mMTris‑HCl缓冲溶液洗涤三遍，然后每孔加入200μL1mg/mL牛血清蛋白进行位点封闭，在37℃的环境下封闭1h；封闭结束后，甩去微孔板内液体，并再次用10mMTris‑HCl缓冲溶液洗涤三遍。7.根据权利要求1所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述3,3',5,5'‑四甲基联苯胺溶液和过氧化氢溶液的体积比为1:1。8.根据权利要求1所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，步骤S2中，反应预设时间为10‑20min，温度为37℃。9.根据权利要求1所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述酸溶液是浓度为2mol/L的硫酸溶液。10.一种权利要求1至9中任一项所述的基于比色和荧光双信号的双酚A浓度的检测方法所用的检测传感器，其特征在于，包括：识别元件：标记过氧化物酶的双酚A抗体；酶催化反应底物：过氧化氢溶液；比色信号源：3,3',5,5'‑四甲基联苯胺溶液；