一种纯化西曲瑞克的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114276414A(43)申请公布日2022.04.05(21)申请号202111661596.6(22)申请日2021.12.30(71)申请人江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司地址222000江苏省连云港市连云港经济技术开发区临浦路28号申请人杭州诺泰澳赛诺医药技术开发有限公司(72)发明人蒋昌威(74)专利代理机构连云港润知专利代理事务所32255代理人刘喜莲(51)Int.Cl.C07K7/23(2006.01)C07K1/16(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图4页(54)发明名称一种纯化西曲瑞克的方法(57)摘要本发明是一种固相合成西曲瑞克的纯化方法，属多肽合成技术领域。主要解决现有技术分离得到西曲瑞克纯度较低、收率较低以及在纯化过程中样品容易析出的技术问题。该方法将固相合成的所得的粗肽溶于30％的醋酸水溶液，然后利用十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，结合两个不同体系的纯化步骤，在各步中均引入浓度较高的醋酸水溶液，既解决了在纯化过程中样品易析出的问题，同时又得到了高纯度高质量高收率的西曲瑞克原料药。CN114276414ACN114276414A权利要求书1/1页1.一种纯化西曲瑞克的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，西曲瑞克粗品预处理得到西曲瑞克粗肽溶液；步骤二，以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，以三氟乙酸为流动相A，以乙腈为流动相B，进行第一次HPLC纯化，去除西曲瑞克峰前杂质；步骤三，添加等体积醋酸水溶液，防止样品析出，得到西曲瑞克第一步样品溶液；步骤四，以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，以醋酸溶液为流动相A；以乙腈为流动相B，进行第二次HPLC纯化，去除西曲瑞克峰后的杂质，得到西曲瑞克第二步样品溶液；步骤五，以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，以乙酸铵为流动相A1、醋酸水溶液为流动相A2；以乙腈为流动相B，进行转盐，将西曲瑞克转盐为醋酸盐，得到西曲瑞克转盐样品溶液；步骤六，向转盐样品溶液加入等体积醋酸水溶液进行浓缩，得到转盐浓缩液；步骤七，将转盐浓缩液倒入冻干盘，放入冻干机中冻干，即得纯化西曲瑞克冻干粉。2.根据权利要求1所述的一种纯化西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤一中，西曲瑞克粗品预处理得到西曲瑞克粗肽溶液；所述预处理的步骤包括：1)将西曲瑞克粗品溶于醋酸水溶液中得到西曲瑞克粗肽溶液；2)取西曲瑞克粗肽溶液用滤膜过滤除去不溶性颗粒，收集滤液备用。3.根据权利要求1所述的一种纯化西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤二中，以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，以0.1％三氟乙酸为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长为260nm，进行第一次HPLC线性梯度洗脱，收取含有西曲瑞克样品的馏分；所述固定相的粒度为8μm，所述0.1％三氟乙酸的制备方法为：取1000ml水，加1ml三氟乙酸。4.根据权利要求1所述的一种纯化西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤三中，向第一步纯化所得样品中加入等体积10％醋酸水溶液，以防止样品的析出。5.根据权利要求1所述的一种纯化西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤四中，以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，以10％醋酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长为260nm，进行第二次HPLC梯度洗脱，收取含有西曲瑞克样品的馏分；所述10％醋酸水溶液的制备方法为：取900ml水加醋酸100ml。6.根据权利要求1所述的一种纯化西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤五中，以十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，以50mmol/L乙酸铵为流动相A1、10％醋酸水溶液为流动相A2；以乙腈为流动相B，进行转盐，将西曲瑞克转盐为醋酸盐，得到西曲瑞克转盐样品溶液。7.根据权利要求1所述的一种纯化西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤六中，向转盐样品溶液加入等体积20％醋酸水溶液进行浓缩，样品在浓缩过程中不会析出，得到澄清的转盐浓缩液。8.根据权利要求1所述的一种纯化西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤七中，冻干时设定冻干曲线升华干燥阶段温度小于转盐浓缩液共熔点。2CN114276414A说明书1/7页一种纯化西曲瑞克的方法技术领域[0001]本发明涉及多肽纯化的领域，特别是一种纯化西曲瑞克的方法。背景技术[0002]中文名：西曲瑞克；英文名：Cetrorelixacetate；西曲瑞克是德国AstaMedica公司研制的一种LHRH拮抗剂，能控制卵巢的刺激作用，预防不成熟卵泡过早排出，帮助受孕。大量研究表明，西曲瑞克对卵巢癌、前列腺癌、子宫纤维癌、子宫内膜异位等疾病有较好的疗效，而且对良性前列腺肥大和卵巢过度刺激综合征有预防和改善作用。[0003]固相合成西曲瑞克，合成物中会产生多种影响样品的纯度和收率的杂质，通过现有纯化技术分离得