一种γ-氨基丁酸的测定方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115902040A(43)申请公布日2023.04.04(21)申请号202211700458.9(22)申请日2022.12.28(71)申请人河南金百合生物科技股份有限公司地址455000河南省安阳市汤阴县产业集聚区兴隆路与振兴大道交叉口东南角（伏道）(72)发明人常世恺李克克岳永亮李光华冯利菲买超梁(74)专利代理机构郑州睿信知识产权代理有限公司41119专利代理师郭佳效(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)G01N30/74(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图7页(54)发明名称一种γ-氨基丁酸的测定方法(57)摘要本发明属于使用高效液相色谱法测定γ‑氨基丁酸的含量领域，具体涉及一种γ‑氨基丁酸的测定方法。该测定方法包括以下步骤：(1)将含γ‑氨基丁酸的样品加水溶解，过微孔滤膜，得到样品溶液；利用邻苯二甲醛对样品溶液进行衍生化处理，得到供试品溶液；(2)将所述供试品溶液进行高效液相色谱分析，外标法定量；所述高效液相色谱分析使用C18色谱柱，等度洗脱；所述等度洗脱的流动相由乙腈和乙酸‑乙酸钠缓冲液按体积比10～25:75～90组成。本发明能够实现可溶粪肠球菌原菌粉制剂中各物质的有效分离，不同物质的色谱峰相对分离效果和峰形达到最佳，对γ‑氨基丁酸测定的检出限低、回收率高，显示出极佳的准确度。CN115902040ACN115902040A权利要求书1/1页1.一种γ‑氨基丁酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将含γ‑氨基丁酸的样品加水溶解，过微孔滤膜，得到样品溶液；利用邻苯二甲醛对样品溶液进行衍生化处理，得到供试品溶液；(2)将所述供试品溶液进行高效液相色谱分析，外标法定量；所述高效液相色谱分析使用C18色谱柱，等度洗脱；所述等度洗脱的流动相由乙腈和乙酸‑乙酸钠缓冲液按体积比10～25:75～90组成。2.如权利要求1所述的γ‑氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述含γ‑氨基丁酸的样品为饲料添加剂，所述饲料添加剂为含γ‑氨基丁酸的菌粉制剂。3.如权利要求2所述的γ‑氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述菌粉制剂为可溶粪肠球菌原菌粉。4.如权利要求3所述的γ‑氨基丁酸的测定方法，其特征在于，每100mL水对应所述可溶粪肠球菌原菌粉的用量为0.1～10g。5.如权利要求1～4中任一项所述的γ‑氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述衍生化处理是使用含邻苯二甲醛的衍生化试剂对样品溶液进行衍生化反应；所述衍生化试剂的溶剂为乙腈，溶质为邻苯二甲醛和β‑巯基乙醇。6.如权利要求5所述的γ‑氨基丁酸的测定方法，其特征在于，每2～3mL乙腈，对应邻苯二甲醛的用量为10～15mg，对应β‑巯基乙醇的用量为10～15μL。7.如权利要求6所述的γ‑氨基丁酸的测定方法，其特征在于，衍生化处理时，将样品溶液和3～5倍体积的所述衍生化试剂混匀，然后与磷酸二氢钾缓冲液混匀，避光反应1～4min。2CN115902040A说明书1/8页一种γ‑氨基丁酸的测定方法技术领域[0001]本发明属于使用高效液相色谱(HPLC)法测定γ‑氨基丁酸的含量领域，具体涉及一种γ‑氨基丁酸的测定方法。背景技术[0002]γ‑氨基丁酸(GABA)作为抑制性神经递质能够调控哺乳动物生理功能，参与脑的许多生理活动，哺乳动物体内很多重要的代谢路径都有γ‑氨基丁酸的参与。GABA作为一种抑制性神经递质，影响着内分泌功能，尤其是腺垂激素的分泌，促进排卵和精子的获能，提高动物的繁殖能力。可有效降低血氨浓度，促进谷氨酸与氨结合转变成尿素排出体外，解除氨毒，增进肝功能。GABA还具有利尿功能，能够减轻肾脏的负担，增强动物肾脏功能。除上述功能外，GABA还具有镇静安神，增强记忆、抗衰老和抗癌等功效。[0003]GABA已成为一种新型功能性因子，正广泛应用于食品、医药化工、饲料添加剂等领域。GABA可以用化学合成法生产，也可以通过植物富集法、微生物发酵法生产。从产品质量检测角度考虑，GABA测定方法的可靠性和准确性至关重要。[0004]关于GABA的测定方法有很多种，如纸电泳法、纸层析法、比色法、高效液相色谱法(HPLC)和氨基酸分析仪测定法等。申请公布号为CN102230921A的中国发明专利申请公开了一种高效液相色谱法对食品中GABA含量进行测定的方法，其线性范围为0.5～1000mg/L，回收率为88.2～89.4％，相对标准偏差为2.3～2.9％。[0005]用于饲料添加剂的可溶粪肠球菌等原菌粉制剂，其除含有GABA外，还含有其他表达产物，传统高效液相色谱法并不能实现其中产物的分离，因而不能实现γ‑氨基丁酸含量的准确测定。发明内容[0006]本发明的目