一种快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108828091A(43)申请公布日2018.11.16(21)申请号201810401597.9(22)申请日2018.04.28(71)申请人福州大学地址350108福建省福州市闽侯县福州地区大学新区学园路2号(72)发明人倪莉周康熙陈丽何冬萍刘志彬张雯张晨(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100代理人蔡学俊(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法(57)摘要本发明公开了一种快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法，其是将发酵液离心去掉固体颗粒及菌丝体，然后采用OPA溶液对所得上清液进行衍生化，再采用液相色谱对衍生化后的溶液进行测定。本发明方法可信度高，准确性好，且其中γ-氨基丁酸衍生后的化合物的保留时间仅为3.51min，较现有标准及报道中的保留时间明显提高，可使实验周期大大缩短，具有良好推广应用前景。CN108828091ACN108828091A权利要求书1/1页1.一种快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）发酵液的预处理：将发酵液采用4500r/min离心10min，然后用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，收集滤液备用；（2）发酵液的衍生化：取步骤（1）中的滤液200μL，加入100μLOPA溶液，于30℃、700r/min条件下震荡混合2min；（3）γ-氨基丁酸的测定：将步骤（2）衍生化后的溶液进行液相色谱测定。2.根据权利要求1所述的快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：所述OPA溶液的配制方法为：称取0.1g邻苯二甲醛，用乙腈溶解并定容至1mL，然后加130μL巯基乙醇，用0.4mol/L的硼酸缓冲溶液定容至10mL，微孔滤膜过滤即得。3.根据权利要求1所述的快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：液相色谱的条件为：LunaC18（2）液相色谱柱4.6×150mm，5μm，柱温40℃，紫外检测波长338nm，进样量20μL，流动相为缓冲液：乙腈：甲醇=40：30：30。4.根据权利要求3所述的快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：流动相中所述缓冲液的配制方法为：称取8.0g结晶乙酸钠，加990mL去离子水，再依次加入3.2mL四氢呋喃、138μL三乙胺，用体积浓度7%的乙酸调pH至7.20±0.05，最后加去离子水定容至1L，微孔滤膜过滤后超声备用。2CN108828091A说明书1/4页一种快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法技术领域[0001]本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法。背景技术[0002]γ-氨基丁酸（GABA）是一种四碳非蛋白氨基酸，广泛存在于动植物中。它对人体有诸多益处，如调节血压与心率；促进营养神经系统的发育，提高脑活力；抑制谷氨酸脱羧反应，降低血氨，保护肝脏等。利用微生物发酵技术来生产γ-氨基丁酸具有成本低、产量高、安全等优点，并可作为天然食品药品添加剂。现阶段对发酵液中γ-氨基丁酸的液相测定方法衍生化操作复杂，且衍生后的γ-氨基丁酸保留时间均在12min以上，使得每个样品的检测时间较长，通常在26min以上，如果样品量较多，总测定时间通常要数十个小时，给科研工作带来不便。发明内容[0003]为克服现有文献中液相检测γ-氨基丁酸时存在的保留时间长、检测时间长的缺点，本发明提供了一种快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法。[0004]为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种快速测定发酵液中γ-氨基丁酸的方法，其将发酵液进行低速离心过膜衍生化后，用液相色谱法进行测定；其具体包括以下步骤：（1）发酵液的预处理：将发酵液采用4500r/min离心10min，然后用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，收集滤液备用；（2）发酵液的衍生化：取步骤（1）中的滤液200μL，加入100μLOPA溶液，于旋转振荡器中30℃、700r/min震荡混合2min；（3）γ-氨基丁酸的测定：将步骤（2）衍生化后的溶液进行液相色谱测定；所用液相色谱的条件为：LunaC18（2）液相色谱柱（4.6×150mm，5μm），柱温40℃，紫外检测波长338nm，进样量20μL，流动相为A相（缓冲液）：B相（100%乙腈）：C相（100%甲醇）=40：30：30（v/v/v）。[0005]所述OPA溶液的配制方法为：称取0.1g邻苯二甲醛（OPA），用乙腈溶解并定容至1mL，然后加130μL巯基乙醇，用0.4mol/L的硼酸缓冲溶液定容至10mL，微孔滤膜过滤即得。[0006]所述0.4mol/L的硼酸缓