一种γ-氨基丁酸含量的测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109115917A(43)申请公布日2019.01.01(21)申请号201811199647.6(22)申请日2018.10.16(71)申请人华熙福瑞达生物医药有限公司地址250101山东省济南市高新技术开发区天辰大街678号申请人山东华熙海御生物医药有限公司(72)发明人陆震张天萌钱晓璐杨旭郭文逸陈玉娟石艳丽郭学平(74)专利代理机构济南泉城专利商标事务所37218代理人李桂存(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图4页(54)发明名称一种γ-氨基丁酸含量的测定方法(57)摘要本发明提供了一种高效液相色谱检测γ-氨基丁酸的方法，属于产品质量检验领域。具体方案如下：采用SepaxHP-SCX柱，以0.2M的磷酸盐缓冲溶液（pH2.5-3.5）为流动相，紫外检测器在210nm分别检测γ-氨基丁酸样品标准品与样品溶液的峰面积，并计算样品含量。本发明的方法克服了传统方法中衍生化试剂易被氧化，衍生物不稳定，随着时间的推移，峰面积极不稳定等缺点，具有回收率、重现性好，精密度高，专属性较强等优点。而且检测物出峰时间短，适合大量高纯度γ-氨基丁酸样品检验。CN109115917ACN109115917A权利要求书1/1页1.一种高效液相色谱检测γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制标准品溶液：精密称取γ-氨基丁酸标准品，用流动相溶解、定容配制成标准品溶液；（2）配制样品溶液：精密称取γ-氨基丁酸样品，用流动相溶解、定容配制成样品溶液；（3）色谱条件：色谱柱：SepaxHP-SCX；流动相：0.2M的磷酸盐缓冲溶液，pH2.5-3.5；流速：0.5-1.2mL/min；检测波长：210nm；（4）含量计算：样品中γ-氨基丁酸的的含量按下式计算：式中：X1——样品中γ-氨基丁酸的含量；Ai——样品中γ-氨基丁酸的峰面积；mS——γ-氨基丁酸标准品的质量（g）；C——γ-氨基丁酸标准品纯度（%）；AS——γ-氨基丁酸标准品的峰面积；m——称取样品的质量（g）。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中还包括标准品溶液配制成系列浓度标准品溶液的步骤；步骤（4）中含量计算替换为：根据系列浓度标准品溶液计算γ-氨基丁酸浓度-峰面积的标准回归曲线y=a+bx，其中，y为γ-氨基丁酸的峰面积，x为γ-氨基丁酸浓度（g/L）；根据γ-氨基丁酸样品的峰面积计算样品中γ-氨基丁酸浓度与含量（%）。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，样品中γ-氨基丁酸的含量为20-99.9%。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，0.01g/L的γ-氨基丁酸的理论峰面积不低于200。5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述流动相的溶质为磷酸二氢钠或磷酸二氢钾和磷酸或盐酸。6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（1）和步骤（2）中，溶液过滤膜过滤；所述滤膜的孔径为0.22-0.45μm。7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，进样量为10-25μL。2CN109115917A说明书1/6页一种γ-氨基丁酸含量的测定方法技术领域[0001]本发明属于产品质量检验领域，具体涉及一种γ-氨基丁酸含量的测定方法。背景技术[0002]γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)，又称氨酪酸，是一种非蛋白质组成的天然氨基酸，分布非常广泛，在动物、植物和微生物中均有GABA存在。随着研究深入，GABA的生理功能不断得到阐明，已发展成为一种新型功能性因子，具有抗压、促睡眠、祛皱、保湿、美白等功效，正逐渐被广泛用于医药、食品保健、化工及农业等行业，在中国、美国、日本等地被批准为公认安全食品，具有较高的开发利用前景。[0003]目前对γ-氨基丁酸的测定主要采用高效液相色谱法，因γ-氨基丁酸无紫外吸收且酸性极强，需经过柱前衍生过程才能检测，所用的衍生化试剂主要有邻苯二甲醛(OPA)、异硫氰酸苯酯(PITC)、2,4-二硝基氟苯(FDNB)、6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)。由于与邻苯二甲醛衍生法步骤简单、反应快速、过量试剂不干扰结果，2010年版中国药典中采用γ-氨基丁酸与邻苯二甲醛衍生进行定量，生成具有较强荧光和紫外吸收的异吲哚衍生物，采用C18柱将其分离出来。由于衍生物极易被氧化，随着时间的推移，峰面积极不稳定，尤其是在长时间大量样品检测的过程中，将直接影响测定结果的准确性和重现性。PITC衍生法所得衍生物稳定，但需在无水条件下进行，容易影响分析柱使用寿命；FDNB衍生法能得到较为稳定的衍生物，但是反应副产物会