靶向人HER2的CAR、CAR基因及其重组载体、CAR-M细胞及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115746149A(43)申请公布日2023.03.07(21)申请号202211401400.4A61K39/00(2006.01)(22)申请日2022.11.09A61P35/00(2006.01)(71)申请人和携科技有限公司地址102600北京市大兴区北京经济技术开发区科创六街88号院6号楼1单元502室(72)发明人杨海霞杨桂花赵进军(74)专利代理机构北京维正专利代理有限公司11508专利代理师胡利彦(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/867(2006.01)C12N5/10(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称靶向人HER2的CAR、CAR基因及其重组载体、CAR-M细胞及其制备方法和应用(57)摘要本申请涉及免疫治疗的技术领域，具体公开了靶向人HER2的CAR、CAR基因及其重组载体、CAR‑M细胞及其制备方法和应用。本申请公开了一种靶向人HER2的CAR，包括前导肽、胞外识别区、铰链区、跨膜区、胞内信号域；所述胞外识别区为结合肿瘤抗原的单链抗体；所述跨膜区为能够激活巨噬细胞吞噬信号的FcγRⅠ、FcγRⅡ、FcγRⅢ、FCER1G、CD36中的任意一种；所述胞内信号域为氨基酸序列如SEQIDNO.5所示的P2结构域。本申请还公开了靶向人HER2的CAR基因及其重组载体。利用上述靶向人HER2的CAR制备的CAR‑M细胞对靶细胞具有较强的吞噬能力和杀伤能力。CN115746149ACN115746149A权利要求书1/1页1.一种靶向人HER2的CAR，其特征在于，包括前导肽、胞外识别区、铰链区、跨膜区、胞内信号域；所述胞外识别区为结合肿瘤抗原的HER2单链抗体；所述跨膜区为能够激活巨噬细胞吞噬信号的FcγRⅠ、FcγRⅡ、FcγRⅢ、FCER1G、CD36中的任意一种；所述胞内信号域为氨基酸序列如SEQIDNO.5所示的P2结构域。2.根据权利要求1所述靶向人HER2的CAR，其特征在于，所述靶向人HER2的CAR的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示。3.一种CAR基因，其特征在于，所述CAR基因编码权利要求1‑2中任一项所述靶向人HER2的CAR。4.一种重组载体，其特征在于，包括权利要求1所述靶向人HER2的CAR或权利要求3所述的CAR基因。5.一种CAR‑M细胞，其特征在于，包括权利要求4所述的重组载体。6.如权利要求5所述的CAR‑M细胞的制备方法，其特征在于，由权利要求4所述的重组载体导入巨噬细胞中获得。7.根据权利要求6所述的CAR‑M细胞的制备方法，其特征在于，所述巨噬细胞为小鼠骨髓来源巨噬细胞。8.根据权利要求6所述的CAR‑M细胞的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：从N端到C端顺序依次将所述前导肽、所述胞外识别区、所述铰链区、所述跨膜区与所述胞内信号域进行连接，得到所述靶向人HER2的CAR；将所述靶向人HER2的CAR与慢病毒载体重组，构建得到所述重组载体；将所述重组载体导入所述巨噬细胞中，得到所述CAR‑M细胞。9.权利要求1‑2中任一项所述靶向人HER2的CAR，权利要求3所述的CAR基因，权利要求4所述的重组载体以及权利要求5所述的CAR‑M细胞在制备治疗肿瘤药物中的应用。2CN115746149A说明书1/6页靶向人HER2的CAR、CAR基因及其重组载体、CAR‑M细胞及其制备方法和应用技术领域[0001]本申请涉及免疫治疗的技术领域，具体涉及一种嵌合抗原受体及其应用、靶向人HER2的CAR、CAR基因及其重组载体、CAR‑M细胞及其制备方法和应用。背景技术[0002]随着肿瘤免疫学理论和技术的发展，生物治疗技术中的过继性免疫细胞治疗(adoptivecelltherapy，ACT)在临床治疗中受到广泛应用，该方法是将体外激活的自体或异体免疫效应细胞输送给患者，随后，免疫效应细胞可以特异性识别并杀灭患者体内的癌细胞和突变的细胞，从而达到治疗肿瘤的目的。[0003]近年来，嵌合抗原受体‑T细胞(CAR‑T)在过继性免疫细胞治疗中应用较为广泛，上述CAR‑T细胞是通过基因工程将嵌合抗原受体(Chimericantigenreceptor，CAR)对T细胞进行修饰，然后经过体外扩增再回输至病人体内，该方法在血液肿瘤治疗上的效果显著。然而，在实体肿瘤的临床治疗过程中，实体瘤细胞外基质会阻碍CAR‑T细胞浸润；另外，实体肿瘤会产生具有免疫抑制特性的肿瘤微环境，使得CART细胞免疫治疗受到了影响。[0004]针对实体肿瘤的免疫治疗难点，嵌合抗原受体‑巨噬细胞(CAR‑M)免疫治疗采用单核/巨噬细胞进行