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本发明公开了一种检测禾谷孢囊线虫的RPA引物和探针、试剂盒及应用,属于植物寄生线虫的检测领域。所述RPA引物和探针,其包括一对特异性引物HaRPA?F3和HaRPA?R3,以及一个探针Ha?probe,其中,所述HaRPA?F3和HaRPA?R3的核苷酸序列如SEQIDNO:1?2所示,所述Ha?probe的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。利用上述RPA引物和探针建立了禾谷孢囊线虫的快速可视化检测方法,且灵敏度高,特异性强,整个检测过程可以在1小时内完成。因此,本发明RPA检测法是一种简单、快速、特异、灵敏度高和直观的方法,可以适用于在田间快速检测禾谷孢囊线虫。