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本发明公开的是一种禽苗用免疫增强剂、二联灭活疫苗及其制备方法和应用,免疫增强剂含有1?1000μg/ml的蜂毒素,制备方法如下:将蜂毒素溶解于生理盐水中,制成母液,用注射器过滤膜以过滤除菌;将免疫增强剂、灭活的新城疫病毒液、灭活的禽流感H9N2亚型病毒液和吐温按照预设的体积比混合制备水相溶液,并且在混合加入吐温后立即水浴,振荡、混匀;将司班和白油按照预设的体积比混合,并另外加入硬脂酸铝制备获得油相溶液;将油相溶液与水相溶液混合,通过高速乳化机搅拌,得到禽苗用免疫增强剂、二联灭活疫苗,具有制备简单、成本低、不良反应小、疫苗免疫效果好等技术特点。