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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115381932A(43)申请公布日2022.11.25(21)申请号202210359027.4(51)Int.Cl.(22)申请日2022.04.07A61K39/116(2006.01)A61K39/108(2006.01)(83)生物保藏信息A61K39/39(2006.01)CCTCCNO:M202115202021.12.01A61P31/04(2006.01)CCTCCNO:M202115192021.12.01C12N1/20(2006.01)CCTCCNO:M202115182021.12.01C12R1/19(2006.01)(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号华中农业大学(72)发明人王湘如贾超莹付霁阳李祖刚胡子喆陈焕春(74)专利代理机构武汉高得专利代理事务所(普通合伙)42268专利代理师姜璐权利要求书1页说明书11页(54)发明名称一种禽大肠杆菌病三价灭活疫苗及其制备方法(57)摘要本发明提供一种禽大肠杆菌病三价灭活疫苗及制备方法,该疫苗含有灭活的O109、O36和O78三种血清型大肠埃希氏菌和佐剂,三种大肠埃希氏菌分别经通气培养后收获菌液再经灭活,再混合后而制成灭活疫苗,O109血清型大肠埃希氏菌,其保藏号为CCTCCM20211519,O36血清型大肠埃希氏菌,其保藏号为CCTCCM20211520,O78血清型大肠埃希氏菌,其保藏号为CCTCCM20211518。本发明对血清O109、O36、O78血清型禽致病性大肠杆菌强毒菌株攻毒的免疫保护率均达到90%以上。本发明对O109、O36、O78血清型禽致病性大肠杆菌菌株感染具有良好的免疫保护效果。CN115381932ACN115381932A权利要求书1/1页1.一种禽大肠杆菌病三价灭活疫苗,该疫苗还含有灭活的O109、O36和O78三种血清型大肠埃希氏菌,三种大肠埃希氏菌分别经通气培养后收获菌液再经灭活,再混合后而制成灭活疫苗,O109血清型大肠埃希氏菌,其保藏号为CCTCCM20211519,O36血清型大肠埃希氏菌,其保藏号为CCTCCM20211520,O78血清型大肠埃希氏菌,其保藏号为CCTCCM20211518。2.根据权利要求1所述的疫苗,其特征在于,所述禽致病性大肠杆菌灭活疫苗中,灭活的各大肠埃希氏菌菌株的抗原含量大于等于1.2×1010CFU/ml。3.根据权利要求2所述的疫苗,其特征在于,还包含佐剂。4.根据权利要求3所述的疫苗,其特征在于,所述佐剂为铝胶佐剂或医用白油佐剂。5.制备权利要求1‑4任意一项所述禽致病性大肠杆菌三价灭活疫苗的方法,其特征在于,其包括如下步骤:1)制备禽致病性大肠杆菌菌株灭活抗原取所述禽致病性大肠杆菌菌株接种于LB培养基中培养,并分别进行一级和二级种子繁殖;然后转接培养,并进行灭活处理;2)配制疫苗将灭活处理的菌液稀释或浓缩,使灭活前活菌数大于等于1.2×1010CFU/ml;取灭活菌液与佐剂按3:1体积比进行混匀,搅拌并乳化处理,得所述禽致病性大肠杆菌灭活疫苗。6.根据权利要求9所述的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述转接培养的条件为二级种子液按照体积比1:100转接至摇瓶中,37℃震荡摇床180r/min,发酵至三小时后,每0.5h测定一次OD600,当发酵液OD600测定为1.3时,停止发酵。通过高速冷冻离心机4℃,8000r/min离心15min,弃上清,采用原体积发酵液的1/20体积的生理盐水重悬菌泥,充分震荡混匀后取100μl菌液倍比稀释后通过活菌计数确定各菌液的终浓度;所述灭活处理采用所述菌液加入体积比0.5%甲醛溶液,37℃温度下摇床100r/min灭活48h。2CN115381932A说明书1/11页一种禽大肠杆菌病三价灭活疫苗及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物技术领域,具体地说,本发明涉及一种禽大肠杆菌病三价灭活疫苗及其制备方法。背景技术[0002]禽致病性大肠杆菌病是由某些特定血清型的致病性大肠杆菌(pathogenicEscherichiacoli)通过多种途径感染不同日龄、品种的鸡,引发不同日龄、品种鸡的急性败血症、肝周炎等多种症状,尤其对雏鸡具有很高的感染率和死亡率,常常继发多种病毒性、呼吸道性疾病等,是影响养鸡业发展的主要细菌性疾病之一。[0003]禽致病性大肠杆菌(AvianpathogenicEscherichiacoli,APEC)血清型繁多,国内外研究表明了APEC的致病性血清多数以O1、O2、O35、O36、O78型血清群是最为主要的致病血清型,不同的区域流行的血清型不同,其致病性也存在差异。[0004]此外,APEC亦是通过其携带质粒和遗