一种SAA重组蛋白及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115819547A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202211428733.6G01N33/68(2006.01)(22)申请日2022.11.15G01N33/53(2006.01)(71)申请人宁波赛珀生物技术有限公司地址315000浙江省宁波市江北区长兴路8号3幢C120(72)发明人王民燕褚旭明夏杰邱雪妮(74)专利代理机构浙江中桓凯通专利代理有限公司33376专利代理师谢英(51)Int.Cl.C07K14/47(2006.01)C12N15/70(2006.01)C07K1/22(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/36(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称一种SAA重组蛋白及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种SAA重组蛋白及其制备方法和应用，制备方法包括以下步骤：S10：构建重组质粒：将SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的基因序列或SEQIDNO：2所示的氨基酸序列对应的核苷酸序列利用NdeI和XhoI双酶切后，插入NdeI和XhoI双酶切的pET‑28a(+)质粒中，获得重组质粒；S20：对重组质粒进行转化与培养；S30：蛋白的表达与纯化。本发明解决了目前重组表达的SAA蛋白在体外的稳定性不佳的技术问题，实现了提高SAA重组蛋白在体外的稳定性的技术效果。CN115819547ACN115819547A权利要求书1/1页1.一种SAA重组蛋白，其特征在于，具有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列或SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的SAA重组蛋白在免疫诊断中的应用。3.根据权利要求2所述的SAA重组蛋白在免疫诊断中的应用，其特征在于，所述SAA重组蛋白用于制备SAA检测试剂盒。4.一种SAA重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S10：构建重组质粒：将SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的基因序列或SEQIDNO：2所示的氨基酸序列对应的核苷酸序列利用NdeI和XhoI双酶切后，插入NdeI和XhoI双酶切的pET‑28a(+)质粒中，获得所述重组质粒；S20：对所述重组质粒进行转化与培养：将所述重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞，培养获得活化菌株；对所述活化菌株进行扩大培养，诱导，获得表达菌株；S30：蛋白的表达与纯化：对所述表达菌株进行培养，诱导，离心收集细胞上清液；对所述细胞上清液进行镍柱纯化，获得所述SAA重组蛋白。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述将所述重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞，培养获得活化菌株，包括以下步骤：S21：取大肠杆菌感受态细胞悬液和所述重组质粒，混匀，获得菌液；S22：取所述菌液至含有卡那霉素的LB固体培养基上，涂布均匀；S23：待所述菌液被所述LB固体培养基吸收后，恒温培养，获得所述活化菌株。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述对所述活化菌株进行扩大培养，诱导，获得表达菌株，包括以下步骤：S24：按照1:100的比例将所述活化菌株接种于含有卡那霉素的LB液体培养基，恒温培养至对数期，IPTG诱导，获得表达菌株。7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述对所述表达菌株进行培养，包括以下步骤：S31：将所述表达菌株接种至含有卡那霉素的LB液体培养基，恒温振荡培养，获得种子菌；S32：按照1:100的比例将所述种子菌接种至LB液体培养基，恒温振荡培养。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述S30中的诱导，离心收集细胞上清液，包括以下步骤：S33：恒温振荡培养至所述S32的菌体OD600达到0.6，添加浓度为0.4mmol/L的IPTG诱导，恒温振荡培养；S34：诱导表达至菌体OD600下降，离心，收集所述细胞上清液。9.根据权利要求6至8中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述恒温振荡培养的温度为37℃。10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述S34之后包括以下步骤：S35：将所述细胞上清液进行镍柱纯化，500mM咪唑洗脱液洗脱，获得纯化后的SAA重组蛋白；S36：透析换液，获得最终SAA重组蛋白。2CN115819547A说明书1/6页一种SAA重组蛋白及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种SAA重组蛋白及其制备方法和应用。背景技术[0002]血清淀粉样蛋白A(SerumAmyloidProteinA，SAA)是一种急性时相反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白，相对分子量约12000。肝内合成的SAA释放入血后，迅速与HDL结合。在体内的代谢主要通过血清、细胞表面及细胞内的蛋白酶降解，肝脏