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本发明涉及HHEX软骨组织特异性敲除小鼠动物模型及其构建方法,采用本发明所述方法构建得到的HHEX基因敲除小鼠模型,可用于探究HHEX基因在小鼠软骨发育中的重要功能和分子机制。所述模型小鼠是敲除HHEX基因中第2号和第3号外显子,通过打靶载体的构建和显微注射,构建F0代小鼠,F0小鼠与组织特异性Cre工具鼠杂交获得F1代敲除杂合子,最终F1代杂合子近交获得敲除纯合子小鼠模型。本发明对于HHEX基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础,对完善软骨发育调控网络具有重大意义。