一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115819331A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202211507852.0G01N33/53(2006.01)(22)申请日2022.11.25G01N33/543(2006.01)(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人杨金易陈丽丹沈玉栋张咏仪王弘徐振林雷红涛孙远明(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102专利代理师赵崇杨(51)Int.Cl.C07D213/643(2006.01)C07K14/77(2006.01)C07K14/795(2006.01)C07K16/44(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图2页(54)发明名称一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用(57)摘要本发明公开了一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用。本发明所述啶氧菌酯半抗原与啶氧菌酯的骨架结构重叠度高，用其制备的人工抗原可以将啶氧菌酯的特征结构暴露出来，使免疫所得的啶氧菌酯人工抗体具有良好的特异性和灵敏度。基于本发明制备所得啶氧菌酯人工抗原和单克隆抗体，本发明还构建了一种啶氧菌酯的间接ELISA检测方法，所述方法的操作简单，检测特异性好，与啶氧菌酯的类似物均无交叉反应，可高特异性识别啶氧菌酯；检测灵敏度高，对啶氧菌酯的最低检测限为0.0263ng/mL；IC50为0.942ng/mL，线性范围为0.098～9.014ng/mL，线性范围广。CN115819331ACN115819331A权利要求书1/1页1.一种啶氧菌酯半抗原，其特征在于，所述半抗原的结构式如式(I)所示：2.权利要求1所述啶氧菌酯半抗原在制备啶氧菌酯人工抗原中的应用。3.一种啶氧菌酯人工抗原，其特征在于，所述人工抗原是将式(I)所示啶氧菌酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述人工抗原的结构式如式(II)所示：4.根据权利要求3所述人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白为鸡卵清白蛋白或血蓝蛋白。5.根据权利要求3或4所述人工抗原在制备啶氧菌酯人工抗体中的应用。6.一种啶氧菌酯单克隆抗体，其特征在于，所述抗体是以权利要求1所述啶氧菌酯半抗原与血蓝蛋白的偶联物为免疫原制备得到。7.一种基于酶联免疫检测啶氧菌酯的免疫原与包被原的组合物，其特征在于，所述免疫原为权利要求1所述啶氧菌酯半抗原与血蓝蛋白的偶联物，所述包被原为权利要求1所述啶氧菌酯半抗原与鸡卵清白蛋白的偶联物。8.权利要求1所述啶氧菌酯半抗原、权利要求3或4所述啶氧菌酯人工抗原、权利要求6所述单克隆抗体或权利要求7所述组合物在制备啶氧菌酯检测产品中的应用。9.一种啶氧菌酯的间接ELISA检测方法，其特征在于，所述方法是以权利要求1所述啶氧菌酯半抗原与鸡卵清白蛋白偶联得到的人工抗原为包被原，以权利要求6所述啶氧菌酯单克隆抗体作为检测抗体进行检测。10.一种啶氧菌酯检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求1所述啶氧菌酯半抗原与鸡卵清白蛋白的偶联物和权利要求6所述啶氧菌酯单克隆抗体。2CN115819331A说明书1/9页一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用技术领域[0001]本发明属于农药残留检测技术领域。更具体地，涉及一种啶氧菌酯半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其应用。背景技术[0002]啶氧菌酯是目前使用效果最好的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂之一，被广泛应用于治疗谷类或蔬菜等农作物的真菌性病害，对白粉病、叶枯病、褐斑病等多种病害均有良好的防治效果，具有良好广阔的市场前景。因此，啶氧菌酯的使用量和使用频率逐年攀升，药物残留问题也越来越受到人们的重视。而提供一种检测特异性好、灵敏度高的检测啶氧菌酯的产品和方法，可以对啶氧菌酯的药物残留进行监测，避免因摄入过多啶氧菌酯给健康带来损害。[0003]目前检测啶氧菌酯残留的主要方法有气相色谱(GC)、液相色谱(LC)以及气相色谱和质谱联用等，此类方法的不足之处在于其检测啶氧菌酯时需要特定的仪器，对仪器的要求较高，且样本前处理和测定过程的操作繁琐，需要专业人员操作，不适于大量样本的批量检测。酶联免疫吸附检测法具有操作简单、一次检测样本量大、仪器设备要求低和样本前处理相对简单等优点，适于农药残留的市场监测和现场监控。现虽已有关于啶氧菌酯的免疫分析方法，但其检测效果仍有待进一步提升。对于啶氧菌酯的酶联免疫吸附检测法来说，抗体的效果很大程度上影响着其检测的特异性和灵敏度，而抗体的效果又取决于引起动物发生免疫反应的抗原结构。因此，提供一种可获得高特异性啶氧菌酯抗体的半抗原和人工抗原，对建立能够快速、灵敏、准确地检测啶氧菌酯的方法具有重要意义。发明内容[0004]本发明要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提