蛋白酶响应的GPCR受体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115850502A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202210826781.4C12N9/22(2006.01)(22)申请日2022.07.14A61K35/17(2015.01)A61K39/00(2006.01)(71)申请人清华-伯克利深圳学院筹备办公室A61P35/00(2006.01)地址518000广东省深圳市南山区桃源街道学苑大道1001号南山智园(72)发明人张海辉雷正扬秦培武(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205专利代理师张建珍(51)Int.Cl.C07K19/00(2006.01)C12N15/62(2006.01)C12N15/867(2006.01)C12N5/10(2006.01)C12N9/50(2006.01)权利要求书2页说明书21页序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称蛋白酶响应的GPCR受体及其应用(57)摘要本发明公开了蛋白酶响应的GPCR受体及其应用。本发明的蛋白酶响应的GPCR受体，包括胞外蛋白酶识别结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域；所述胞外蛋白酶识别结构域包含蛋白酶水解的肽段；所述胞内信号结构域包含HCV酶水解肽段、核定位序列NLS、Cas蛋白酶和偶联核转录因子。本发明蛋白酶响应的GPCR受体能够通过响应细胞外蛋白酶，诱导内源性dCas9组装入核激活调节自然杀伤细胞内的嵌合抗原受体信号通路，为开发新的精确免疫细胞疗法提供新的解决方案。CN115850502ACN115850502A权利要求书1/2页1.蛋白酶响应的GPCR受体，其特征在于，所述GPCR受体包括胞外蛋白酶识别结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域；所述胞外蛋白酶识别结构域包含所述蛋白酶的水解肽段；所述胞内信号结构域包含HCV酶水解肽段；所述HCV酶水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。2.根据权利要求1所述的蛋白酶响应的GPCR受体，其特征在于，所述胞内信号结构域还包含核定位序列NLS；优选的，所述核定位序列NLS的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示；优选的，所述胞内信号结构域还包含Cas蛋白酶；优选的，所述胞内信号结构域还包含偶联核转录因子。3.根据权利要求1所述的蛋白酶响应的GPCR受体，其特征在于，所述蛋白酶的水解肽段包括TEV蛋白酶水解肽段、凝血酶水解肽段、MMP1水解肽段、PLAU水解肽段、MMP13水解肽段、解整合素金属蛋白酶10水解肽段、解整合素金属蛋白酶17水解肽段、肠激酶水解肽段、凝血因子Xa水解肽段、弗林蛋白酶水解肽段、丙型肝炎病毒蛋白酶水解肽段、人鼻病毒3C蛋白酶水解肽段、李痘病毒蛋白酶水解肽段和向日葵温和花叶病毒蛋白酶水解肽段中的至少一种；所述TEV蛋白酶水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；所述凝血酶水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.20所示；所述MMP1水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.25所示；所述PLAU水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.27所示；所述MMP13水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.30所示；所述解整合素金属蛋白酶10水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.31所示；所述解整合素金属蛋白酶17水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.32所示；所述肠激酶水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.33所示；所述凝血因子Xa水解肽段的氨基酸序列为如SEQIDNO.34或SEQIDNO.35所示；所述弗林蛋白酶水解肽段的氨基酸序列为如SEQIDNO.36或SEQIDNO.37所示；所述丙型肝炎病毒蛋白酶水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；所述人鼻病毒3C蛋白酶水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.38或SEQIDNO.39所示；所述李痘病毒蛋白酶水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.40所示；所述向日葵温和花叶病毒蛋白酶水解肽段的氨基酸序列如SEQIDNO.41或SEQIDNO.42所示。4.根据权利要求1所述的蛋白酶响应的GPCR受体，其特征在于，所述跨膜结构域包括黏附型GPCR跨膜肽段；优选的，所述黏附型GPCR跨膜肽段包括GPR56跨膜肽段、ADGRL3跨膜肽段、CD97跨膜肽段、EMR1跨膜肽段中的任一种。5.根据权利要求2所述的蛋白酶响应的GPCR受体，其特征在于，所述Cas蛋白酶包括dCas9蛋白酶或dCas12蛋白酶。6.一种蛋白酶响应的GPCR受体组合物，其特征在于，包括第一蛋白酶响应的GPCR受体和第二蛋白酶响应的GPCR受体；其中，2CN115850502A权利要求书2/2页所述第一蛋白酶响应的GPCR受体为权利要求1‑4任一项所述的蛋白酶响应的GPCR受体，其中所述Cas蛋白酶的肽段为Cas蛋白酶N端肽段；所述第二蛋