抗体和缀合物.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115850449A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211197665.7(22)申请日2022.09.29(71)申请人苏州智核生物医药科技有限公司地址215123江苏省苏州市苏州工业园区星湖街218号生物纳米园A4楼201/202单元(72)发明人须涛齐浩王超杨艳玲杜海菁孙艳(74)专利代理机构上海巅石知识产权代理事务所(普通合伙)31309专利代理师游琦(51)Int.Cl.C07K16/00(2006.01)C07K19/00(2006.01)权利要求书1页说明书103页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称抗体和缀合物(57)摘要本申请涉及一种分离的抗原结合蛋白，其包含重链抗体的可变抗原结合结构域(VHH)，其中所述VHH包含一对或多对经改造的半胱氨酸残基，其中每对所述半胱氨酸残基各自独立地包含在第一位置的半胱氨酸残基和在第二位置的半胱氨酸残基，所述在第一位置的半胱氨酸残基能够与所述在第二位置的半胱氨残基酸配对形成二硫键。CN115850449ACN115850449A权利要求书1/1页1.抗原结合蛋白，其包含重链抗体的可变抗原结合结构域(VHH)，其中所述VHH包含一对或多对经改造的半胱氨酸残基，其中每对所述经改造的半胱氨酸残基各自独立地包含在第一位置的半胱氨酸残基和在第二位置的半胱氨酸残基，所述在第一位置的半胱氨酸残基与所述在第二位置的半胱氨酸残基能够配对形成二硫键；其中所述在第一位置的半胱氨酸残基与所述在第二位置的半胱氨酸残基中的至少一个是经突变得到的。2.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白，其中所述在第一位置的半胱氨酸残基与所述在第二位置的半胱氨酸残基均是经突变得到的。3.根据权利要求1‑2中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述二硫键能够在被还原剂还原后形成巯基，其中所述巯基允许所述抗原结合蛋白在所述第一位置和/或所述第二位置缀合有效负载物。4.根据权利要求1‑3中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述在第一位置的半胱氨酸残基与所述在第二位置的半胱氨酸残基的Cβ‑Cβ不超过约5.根据权利要求1‑4中任一项所述的抗原结合蛋白，其中在所述第一位置的氨基酸残基与在所述第二位置的氨基酸残基的相对溶剂可及性(ASA％)不小于约20％。6.根据权利要求1‑5中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述第一位置和第二位置的组合选自以下组合中的至少一种：a)66‑82b；b)3‑25；c)7‑8；d)84‑113；e)83‑85；f)68‑81；g)17‑82a；h)41‑42；i)9‑108；j)11‑110；k)87‑111；l)13‑16；m)12‑18；n)39‑45；和o)14‑113其中数字是指VHH按照Kabat编号方式定义的氨基酸残基位置。7.根据权利要求1‑6中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白为人源化的VHH抗体或全人源VHH抗体。8.根据权利要求1‑7中任一项所述的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白特异性结合肿瘤抗原或非肿瘤抗原。9.融合多肽，其包含权利要求1‑8中任一项所述的抗原结合蛋白。10.免疫缀合物，其包含权利要求1‑8中任一项所述的抗原结合蛋白，有效负载物，和将所述有效负载物连接到所述抗原结合蛋白的连接子。2CN115850449A说明书1/103页抗体和缀合物技术领域[0001]本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种抗体和缀合物。背景技术[0002]近年来，抗体药物应用于很多领域，而且已经通过抗体药物对很多疾病进行了诊断及治疗。因为抗体药物具有很好的靶向性，因此开发了很多针对不同类型抗体的治疗手段。其中抗体‑药物缀合物/放射性核素就是其中一种类型。而提高药物与抗体的比率(DAR)可以有效的提高治疗效果。[0003]纳米抗体相对于传统抗体有很多优势，比如分子量较小，只有12～15kDa，穿透力强，稳定性好。而且与人的VH相比，纳米抗体的CDR3区更长，可以形成凸环结构，能够深入抗原内部更好的结合抗原，因而亲和力更好。[0004]目前，纳米抗体的偶联方式多采用随机偶联至抗体的赖氨酸残基上或末端cys的定点偶联。随机偶联虽然会增加DAR值但也会增加很多不确定性，如偶联位点比较随机，还会产生不均一的抗体‑药物偶联混合物，而且工艺控制起来相对复杂，可能还会影响样品的生物学活性和稳定性。末端定点偶联相比随机偶联的优点是偶联位点比较固定，但相对的DAR值比较低，仅为1，而且因为在抗体的末端加了cysteine，很容易形成聚体，这就对裸抗的生产工艺有很大的挑战。发明内容[0005]为了克服背景技术中的技术问题，本申请提供了一种基于纳米抗体的表面cysteine定点偶联技术。相对于之前提到的两种偶联方式，表面定点偶联技术