一种EST-SSR分子标记引物组及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115873986A(43)申请公布日2023.03.31(21)申请号202211660785.6G16B40/30(2019.01)(22)申请日2022.12.23(71)申请人四川省草原科学研究院地址610097四川省成都市郫都区红光镇国宁西路368号申请人四川农业大学(72)发明人张建波白史且李达旭刘英杰马啸赵俊茗陈丽敏(74)专利代理机构北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙)11732专利代理师张宁(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6858(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书10页序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称一种EST-SSR分子标记引物组及其应用(57)摘要本发明提供了一种EST‑SSR分子标记引物组及其应用，属于EST‑SSR分子标记技术领域，本发明提供的EST‑SSR分子标记引物组具有重复性好，谱带清晰，多态性高等的特点，是一种稳定存在的新标记，填补了假俭草基于转录组开发SSR引物的空白。同时，本发明提供的EST‑SSR分子标记引物组可应用于假俭草种质资源鉴定、遗传谱系分析、遗传图谱构建、种质资源保护和辅助育种等领域。CN115873986ACN115873986A权利要求书1/2页1.一种用于鉴定假俭草种质资源间遗传距离的EST‑SSR分子标记引物组，其特征在于，所述EST‑SSR分子标记引物组包括扩增SSR1～SSR26所示的分子标记的引物对：SSR1的引物对如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示；SSR2的引物对如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示；SSR3的引物对如SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示；SSR4的引物对如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示；SSR5的引物对如SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示；SSR6的引物对如SEQIDNo.11和SEQIDNo.12所示；SSR7的引物对如SEQIDNo.13和SEQIDNo.14所示；SSR8的引物对如SEQIDNo.15和SEQIDNo.16所示；SSR9的引物对如SEQIDNo.17和SEQIDNo.18所示；SSR10的引物对如SEQIDNo.19和SEQIDNo.20所示；SSR11的引物对如SEQIDNo.21和SEQIDNo.22所示；SSR12的引物对如SEQIDNo.23和SEQIDNo.24所示；SSR13的引物对如SEQIDNo.25和SEQIDNo.26所示；SSR14的引物对如SEQIDNo.27和SEQIDNo.28所示；SSR15的引物对如SEQIDNo.29和SEQIDNo.30所示；SSR16的引物对如SEQIDNo.31和SEQIDNo.32所示；SSR17的引物对如SEQIDNo.33和SEQIDNo.34所示；SSR18的引物对如SEQIDNo.35和SEQIDNo.36所示；SSR19的引物对如SEQIDNo.37和SEQIDNo.38所示；SSR20的引物对如SEQIDNo.39和SEQIDNo.40所示；SSR21的引物对如SEQIDNo.41和SEQIDNo.42所示；SSR22的引物对如SEQIDNo.43和SEQIDNo.44所示；SSR23的引物对如SEQIDNo.45和SEQIDNo.46所示；SSR24的引物对如SEQIDNo.47和SEQIDNo.48所示；SSR25的引物对如SEQIDNo.49和SEQIDNo.50所示；SSR26的引物对如SEQIDNo.51和SEQIDNo.52所示。2.一种鉴定假俭草种质资源间遗传距离的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的EST‑SSR分子标记引物组和检测试剂。3.一种鉴定假俭草种质资源间遗传距离的的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)分别提取不同种质来源的假俭草样品的基因组DNA；(2)使用权利要求1所述EST‑SSR分子标记引物组进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；(3)将所述PCR扩增产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，获得扩增条带，将所述扩增条带在EXCEL2016中进行统计，并在软件GenAlex6.51b2中进行遗传距离、主坐标的相关分析，获得统计及分析的数据；(4)将所述统计及分析的数据通过FREETREE软件进行聚类图构建，获得假俭草种质资源的聚类分析图，即可获得假俭草种质资源间遗传距离的鉴定结果。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述基因组DNA的浓度为18～2CN115873986A权利要求书2/2页22ng/ml。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增的反应体系以20μL计，包括：3～5μL20n