一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115838818A(43)申请公布日2023.03.24(21)申请号202210795552.0(22)申请日2022.07.07(71)申请人赣南师范大学地址341000江西省赣州市蓉江新区师院南路1号申请人华中农业大学(72)发明人陈道宗葛贤宏刘镒金庆东徐林珊王晶李再云(74)专利代理机构武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙)42231专利代理师姜婷(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书4页序列表（电子公布）附图1页(54)发明名称一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组及其应用(57)摘要本发明公开了一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组及其应用，本发明通过紫秆油菜PR和绿秆油菜ZS11的变异信息，确定了与油菜茎秆颜色共分离的特异标记，进而获得了能够用于油菜茎秆颜色鉴定的引物组，所述引物组的序列如SEQIDNO:1～4所示。利用该引物组构建的油菜茎秆颜色鉴定方法，不仅特异性好，且操作简单，可极早判断油菜植株茎秆表型，加快选育创制抗病紫秆油菜新品种的过程。CN115838818ACN115838818A权利要求书1/1页1.一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组，其特征在于，包括：ZS11.MYB75.C6.TF：5'‑GGAATCATAGATTCAAATGTTCCAA‑3'，ZS11.MYB75.C6.TR：5'‑TGCATTCGCGTCTCCTGAAA‑3'；或/和ZG.MYB75.C6.TF：5'‑CTGGTGTACTTTGATTCTTCTTTTAATAA‑3'，ZG.MYB75.C6.TR：5'‑AGTAATGGATCATTACATATGAAAAGTAC‑3'。2.如权利要求1所述的分子标记引物组在鉴定油菜紫色茎秆中的应用，其特征在于，以待测油菜植株的DNA为模板，用权利要求1所述的分子标记引物组进行PCR扩增，所得扩增产物进行电泳检测。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的体系为：共计12μL，模板2.0μL，2×Mix5.0μL，PrimerF/R各0.5μL，ddH2O余量。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性3min；94℃变性30sec，57℃复性30sec，68℃延伸2min，共35个循环；68℃延伸10min。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述电泳检测为采用2％琼脂糖凝胶电泳检测。6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，若ZG.MYB75.C6.TF/R检测有条带，且ZS11.MYB75.C6.TF/R检测无条带，则待鉴定油菜单株为纯合紫色茎秆个体。7.如权利要求1所述分子标记引物组在油菜茎秆颜色选择育种中的应用。8.包含权利要求1所述分子标记引物组的检测试剂盒。9.根据权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括PCR扩增试剂。10.如权利要求8所述的检测试剂盒在油菜茎秆颜色选择育种中的应用。2CN115838818A说明书1/4页一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组及其应用技术领域[0001]本发明属于油菜分子育种技术领域，具体涉及一种鉴定油菜紫色茎秆性状的分子标记引物组及其应用。背景技术[0002]油菜是作为重要的油料作物之一，兼具蜜用、饲用、肥用、菜用、休闲观光等功能，具有重要的经济价值。然而，我国南方油菜主要以冬油菜为主，于春季开花结实，与南方雨季存在较长时间重叠，高温高湿的环境导致菌核病等病害侵染甘蓝型油菜，导致油菜大量减产，严重制约油菜产业发展。菌核病侵染油菜主要容易在茎秆等器官，导致油菜倒伏、不能完全成熟等，影响油菜产量。[0003]紫秆油菜为远缘杂交获得的种质资源，表现为茎秆紫红色，具有较好的抗病效果，故急需一批可利用的分子标记进行早期辅助选择，以提高选择效率，减少田间种植规模和后期鉴定工作，缩短育种时间。然而目前为止还没有功能标记被应用于紫秆油菜的选育。发明内容[0004]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种能够鉴定油菜紫色茎杆形状的分子标记引物，以便于极早判断油菜植株茎秆表型，加快选育创制不同遗传背景的抗病紫秆油菜新品种。[0005]为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：[0006]本发明基于紫杆油菜PR和绿杆油菜ZS11中的目标基因BnaMYB75.C6的序列变异信息，获得了一个与油菜茎秆颜色共分离的Indel特异标记，进而得到用于扩增检测该标记的引物，具体的，引物具体包括：[0007]ZS11.MYB75.C6.TF：5'‑GGAATCATAGATTCAAATGTTCCAA‑3'(SEQIDNO:1)，[0008]ZS11.MYB75.C6